| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 绪言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| ·水稻黑条矮缩病病原病毒研究进展 | 第9-12页 |
| ·水稻黑条矮缩病的发生分布 | 第9页 |
| ·RBSDV病毒粒子形态与特性 | 第9-10页 |
| ·RBSDV的寄主范围、主要症状和传播介体 | 第10页 |
| ·RBSDV基因组结构 | 第10-12页 |
| ·植物抗病毒基因工程 | 第12-21页 |
| ·利用非病毒来源的抗病毒基因 | 第13-15页 |
| ·植物自身的抗病毒基因 | 第13-14页 |
| ·来自动物或人的抗性基因 | 第14-15页 |
| ·利用病毒来源的抗性基因 | 第15-19页 |
| ·多基因策略 | 第19-20页 |
| ·展望 | 第20-21页 |
| 第二章 水稻黑条矮缩病毒P9-1蛋白的原核表达、抗血清制备及其特性 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-31页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的切胶纯化 | 第23页 |
| ·克隆载体pGEM-S9-1的构建 | 第23-24页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体pSBET-S9-1的构建 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE检测目的基因的表达 | 第27-28页 |
| ·抗血清制备 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第28-29页 |
| ·免疫小鼠(ICR)制备抗血清 | 第29页 |
| ·吸附去除非目的蛋白产生的抗体 | 第29页 |
| ·Western blot检测抗血清纯度 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE | 第29-30页 |
| ·Western blot | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·表达载体pSBET-S9-1的构建 | 第31-32页 |
| ·P9-1蛋白表达的诱导及优化 | 第32-33页 |
| ·Western blot检测 | 第33-35页 |
| 第三章 黑条矮缩病毒S9基因表达载体的构建 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·农杆菌菌株及质粒等 | 第35页 |
| ·酶和化学试剂 | 第35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·主要培养基 | 第35-36页 |
| ·基本溶液的配制 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物的切胶纯化 | 第36页 |
| ·克隆载体pMD-S9的构建 | 第36页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第36页 |
| ·植物表达载体pRR-S9的构建 | 第36页 |
| ·植物表达载体pRR-S9的农杆菌转化 | 第36-37页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体导入农杆菌感受态细胞 | 第37页 |
| ·重组转化子的PCR鉴定 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-39页 |
| ·RBSDV-S9基因的扩增及克隆 | 第37页 |
| ·中间表达载体的构建 | 第37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·植物表达载体pRR-S9的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组双元载体转化农杆菌及PCR验证 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 水稻黑条矮缩病毒S9基因对水稻的遗传转化 | 第41-57页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·水稻品种和农杆菌菌株等 | 第41页 |
| ·酶和化学试剂 | 第41页 |
| ·培养基的配制 | 第41-43页 |
| ·各种激素、抗生素的配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-49页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第43-44页 |
| ·转化受体的准备 | 第43页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导及继代培养 | 第43-44页 |
| ·愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第44页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第44页 |
| ·植株的再生 | 第44页 |
| ·水稻总DNA的大量提取 | 第44-45页 |
| ·水稻总DNA的小量提取 | 第45页 |
| ·PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·Southern blot分析 | 第46-48页 |
| ·植物基因组DNA的酶切 | 第46页 |
| ·电泳及转膜 | 第46-47页 |
| ·探针标记 | 第47页 |
| ·Southern杂交与洗膜 | 第47页 |
| ·杂交信号的检测 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR检测 | 第48-49页 |
| ·用RNeasy Plant mini(QIAGEN)试剂盒提取RBSDV总RNA | 第48页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增 | 第49页 |
| ·Western blot分析 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·水稻的转化 | 第49-51页 |
| ·愈伤组织的诱导和培养 | 第49页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第49页 |
| ·抗性愈伤组织的植株再生 | 第49-51页 |
| ·T_0代转基因水稻的检测 | 第51-52页 |
| ·PCR检测 | 第51-52页 |
| ·Southern杂交检测 | 第52页 |
| ·T_1代转基因水稻的检测 | 第52-55页 |
| ·PCR检测 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR | 第53-54页 |
| ·Western杂交检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·农杆菌的转化条件 | 第55页 |
| ·抗生素浓度对分化的影响 | 第55页 |
| ·转基因情况 | 第55-57页 |
| 第五章 结论与进一步研究的建议 | 第57-58页 |
| ·结论 | 第57页 |
| ·进一步研究建议 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 硕士研究期间发表的论文 | 第63页 |