| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| ·禽流感病毒概述 | 第11-17页 |
| ·禽流感病毒的结构 | 第12-13页 |
| ·血凝素的分子生物学结构和作用机制 | 第12-13页 |
| ·神经氨酸酶的分子生物学结构和作用机制 | 第13页 |
| ·禽流感病毒的理化特性 | 第13-14页 |
| ·禽流感病发症 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒的预防 | 第15页 |
| ·禽流感病毒的检测方法 | 第15-16页 |
| ·病原学诊断方法 | 第15页 |
| ·血清诊断方法 | 第15-16页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第16页 |
| ·禽流感疫苗的开发 | 第16-17页 |
| ·全病毒灭活疫苗 | 第16-17页 |
| ·基因工程疫苗 | 第17页 |
| ·超抗原肠毒素SEC2作为免疫佐剂的研究进展 | 第17-18页 |
| ·超抗原肠毒素的结构和生物学特性 | 第17-18页 |
| ·肠毒素粘膜免疫佐剂的作用机制 | 第18页 |
| ·转基因植物疫苗简介 | 第18-20页 |
| ·转基因植物疫苗的免疫原理 | 第19-20页 |
| ·莱茵衣藻作为生物反应器的安全性 | 第20页 |
| ·项依据及研究意义 | 第20页 |
| ·本实验的创新之处 | 第20-21页 |
| ·本项目研究的技术路线 | 第21页 |
| ·有待于进一步开展的工作 | 第21-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·藻种与质粒材料 | 第23页 |
| ·常规分子操作试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·细菌培养基(LB培养基) | 第24页 |
| ·常规TAP培养基的配制 | 第24-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·常规实验操作方法 | 第26页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组的提取 | 第26页 |
| ·金黄色葡萄球菌SEC2基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·金黄色葡萄球菌SEC2基因的定点突变 | 第27页 |
| ·金黄色葡萄球菌SEC2基因原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·IPTG诱导大肠杆菌中SEC2基因的表达 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28页 |
| ·利用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中SEC2基因的表达 | 第28-29页 |
| ·SEC2基因和HAV基因衣藻遗传表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化 | 第30-31页 |
| ·转化用重组质粒的制备 | 第30-31页 |
| ·“珠磨法”莱茵衣藻的遗传转化 | 第31页 |
| ·转基因衣藻总DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·转基因衣藻总DNA的PCR检测 | 第32页 |
| ·转基因衣藻总DNA的Southern Blot检测 | 第32-33页 |
| ·SEC基因和HAC基因杂交探针的制备 | 第32页 |
| ·真空转膜法进行转膜 | 第32-33页 |
| ·转基因衣藻总RNA的提取 | 第33页 |
| ·转基因衣藻的RT-PCR检测 | 第33-34页 |
| ·转基因衣藻的Western blot检测 | 第34-36页 |
| ·转基因衣藻的热激诱导 | 第34-35页 |
| ·转基因衣藻总蛋白的提取 | 第35页 |
| ·Western blot分析 | 第35-36页 |
| ·转基因藻细胞的收集 | 第36页 |
| ·Balb/c小鼠的饲养 | 第36-37页 |
| ·小鼠脾脏细胞的制备与淋巴细胞亚群的测定 | 第37页 |
| ·小鼠血清的制备与抗体的检测 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-54页 |
| ·超抗原SEC基因的克隆和原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·超抗原SEC基因的定点突变 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·遗传表达载体PH124SEC和PH124HAV的构建 | 第41页 |
| ·重组质粒PH124SEC和PH124HAV的遗传转化 | 第41-43页 |
| ·SEC基因和HAV基因总DNA-PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·转化株总RNA的提取以及RT-PCR鉴定 | 第44页 |
| ·转SEC和HAV基因衣藻的DNA-Southern Blot鉴定 | 第44-48页 |
| ·转SEC和HAV基因衣藻转化株的Western Blot分析 | 第48-50页 |
| ·转SEC基因衣藻的动物实验和免疫学活性分析 | 第50-52页 |
| ·小鼠血清初步的western blot检测 | 第52-54页 |
| 4 结论与讨论 | 第54-58页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-58页 |
| ·超抗原肠毒素C2基因的作用机理分析 | 第54-55页 |
| ·超抗原肠毒素C2基因的免疫学活性分析 | 第55-56页 |
| ·真核表达中蛋白的翻译与修饰 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
