| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·蛛丝的种类 | 第14-16页 |
| ·蛛丝的分子组成 | 第16-26页 |
| ·主壶腹腺丝蛋白 | 第16-19页 |
| ·次壶腹腺丝蛋白 | 第19-21页 |
| ·鞭毛状腺丝蛋白 | 第21-23页 |
| ·包卵丝蛋白 | 第23-24页 |
| ·葡萄状腺丝蛋白 | 第24-25页 |
| ·梨形腺丝蛋白 | 第25页 |
| ·聚合状腺体粘液蛋白 | 第25-26页 |
| ·蛛丝蛋白的自组装 | 第26-28页 |
| ·天然蛛丝蛋白的自组装 | 第26-27页 |
| ·重组蛛丝蛋白的自组装 | 第27-28页 |
| ·蛛丝的应用 | 第28页 |
| ·重组蜘蛛丝蛋白的分子设计及表达 | 第28-30页 |
| ·重组蛛丝蛋白的人工纺丝 | 第30-31页 |
| ·本课题研究的内容和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 实验材料、基本技术和设计方案 | 第32-49页 |
| ·材料和仪器 | 第32-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·酶与主要试剂 | 第32-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·培养基和常用试剂的配置 | 第35-40页 |
| ·实验基本技术 | 第40-48页 |
| ·引物磷酸化 | 第40页 |
| ·PCR反应 | 第40-41页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第41-42页 |
| ·凝胶回收 | 第42页 |
| ·质粒抽提 | 第42-43页 |
| ·化学转化 | 第43页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第43-44页 |
| ·蛋白凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第44页 |
| ·Western blot印迹 | 第44-45页 |
| ·蛋白纯化 | 第45-46页 |
| ·自组装颗粒大小的测定 | 第46-47页 |
| ·Zeta电位测定 | 第47页 |
| ·样品表面观察 | 第47-48页 |
| ·实验方案 | 第48-49页 |
| 第三章 实验过程 | 第49-62页 |
| ·以PT7HisTrxHis为载体克隆的构建 | 第49-57页 |
| ·R1SR2克隆的构建 | 第49-51页 |
| ·R1R2克隆的构建 | 第51-53页 |
| ·R1SR2C克隆的构建 | 第53-55页 |
| ·NTR1SR2CT克隆的构建 | 第55-57页 |
| ·重组蛛丝蛋白表达及Western Blot检测 | 第57-58页 |
| ·重组蛛丝蛋白表达 | 第57页 |
| ·重组蛛丝蛋白可溶性分析 | 第57页 |
| ·Western blot验证表达的重组蛛丝蛋白 | 第57-58页 |
| ·优化诱导表达温度 | 第58页 |
| ·大规模蛋白纯化 | 第58页 |
| ·重组蛛丝蛋白溶液透析和冷冻干燥 | 第58-59页 |
| ·透析 | 第58-59页 |
| ·冷冻干燥 | 第59页 |
| ·重组蛛丝蛋白成纤维表面形态观察 | 第59页 |
| ·重组蛛丝蛋白的二级结构 | 第59-60页 |
| ·盐离子对重组蛛丝蛋白自组装的影响 | 第60-61页 |
| ·重组蛛丝蛋白制样 | 第60页 |
| ·NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometer测定重组蛛丝蛋白上清浓度 | 第60页 |
| ·重组蛛丝蛋白自组装颗粒的大小 | 第60-61页 |
| ·Zeta电位 | 第61页 |
| ·重组蛛丝蛋白自组装形态观察 | 第61页 |
| ·溶剂挥发速率对成纤维的影响 | 第61-62页 |
| 第四章 实验结果 | 第62-74页 |
| ·以PT7HisTrxHis为载体一系列克隆的鉴定 | 第62页 |
| ·重组蛛丝蛋白的表达及Western blot特异性鉴定 | 第62-64页 |
| ·重组蛛丝蛋白的纯化 | 第64-66页 |
| ·重组蛛丝蛋白成纤维表面形态 | 第66-67页 |
| ·重组蛛丝蛋白二级结构 | 第67-68页 |
| ·盐离子对重组蛛丝蛋白自组装的影响 | 第68-72页 |
| ·NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometer测定蛋白上清浓度 | 第68-69页 |
| ·自组装颗粒的大小 | 第69-70页 |
| ·Zeta电位 | 第70-71页 |
| ·自组装蛋白形貌观察 | 第71-72页 |
| ·溶剂挥发速率对成纤维的影响 | 第72-74页 |
| 第五章 分析讨论 | 第74-78页 |
| ·不同模块蛛丝蛋白的表达及成膜情况 | 第74-75页 |
| ·蛛丝蛋白的二级结构 | 第75页 |
| ·盐离子及溶剂挥发速率对蛛丝蛋白自组装的影响 | 第75-76页 |
| ·创新点 | 第76页 |
| ·首次对重组次壶腹腺丝蛋白的自组装进行研究 | 第76页 |
| ·基因无缝连接 | 第76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 硕士期间发表论文和参加科研情况说明 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
