| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·miRNA的研究进展 | 第13-16页 |
| ·miRNA的发现 | 第13-14页 |
| ·miRNA的生成及作用机制 | 第14-15页 |
| ·miRNA与siRNA的区别 | 第15-16页 |
| ·miRNA靶基因的预测 | 第16-18页 |
| ·生物信息学的方法 | 第16-17页 |
| ·生物学实验方法 | 第17-18页 |
| ·miRNA靶基因的鉴定 | 第18页 |
| ·miRNA对乳腺发育的调控作用 | 第18-19页 |
| ·miRNA-451的研究进展 | 第19页 |
| ·腺病毒载体系统 | 第19-21页 |
| ·miRNA-451靶基因的研究进展 | 第21-22页 |
| ·CAST的研究进展 | 第21页 |
| ·ING3的研究进展 | 第21-22页 |
| ·FLT-1的研究进展 | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 乳腺发育相关的miRNA-451的表达谱分析 | 第24-29页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·试验动物及组织样品的采集 | 第24页 |
| ·RNA的提取与cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·miRNA的stem-loop RT-PCR定量分析 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-27页 |
| ·总RNA提取和检测结果 | 第26页 |
| ·差异表达的miRNA-451时空表达分析 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 奶山羊miRNA-451靶基因的初步研究 | 第29-44页 |
| ·材料与方法 | 第29-35页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·乳腺组织总RNA提取及cDNA的合成 | 第29页 |
| ·miRNA-451靶基因的预测 | 第29-30页 |
| ·靶基因对应的山羊序列的扩增与验证 | 第30-31页 |
| ·靶序列野生型与突变型psiCHECK-2载体构建 | 第31-34页 |
| ·293T细胞的转染 | 第34-35页 |
| ·双荧光素酶报告检测 | 第35页 |
| ·统计分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-41页 |
| ·靶基因的预测 | 第35-36页 |
| ·对应山羊靶基因序列的扩增与比对 | 第36-37页 |
| ·野生型psiCHECK-2载体构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·突变型psiCHECK-2载体构建与鉴定 | 第38-40页 |
| ·psiCHECK-2载体测序验证 | 第40页 |
| ·293T细胞培养及转染 | 第40页 |
| ·不同靶序列与miRNA-451作用验证结果 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·miRNA靶基因的预测方法 | 第41-42页 |
| ·miRNA靶基因的验证 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第四章 miRNA-451腺病毒过表达载体的构建 | 第44-57页 |
| ·材料与方法 | 第44页 |
| ·试验材料 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·pAd-miRNA-451重组腺病毒质粒的构建 | 第44-51页 |
| ·奶山羊miRNA-451前体序列的PCR引物设计 | 第44-45页 |
| ·奶山羊miRNA-451前体序列的PCR扩增 | 第45页 |
| ·pAdTrack-CMV-miRNA-451重组质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·pAd-miRNA-451重组腺病毒质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·重组腺病毒的包装与扩繁 | 第49页 |
| ·最佳MOI的确定(Multiplicity of Infection) | 第49页 |
| ·重组过表达载体的验证 | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·miRNA-451前体序列的PCR扩增 | 第51页 |
| ·pAdTrack-CMV-miRNA-451表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pAd-miRNA-451的PacⅠ酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组腺病毒过表达载体的包装和扩增 | 第52-53页 |
| ·最佳MOI的确定 | 第53-54页 |
| ·重组腺病毒在293T细胞中的表达情况 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-57页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第57-58页 |
| ·结论 | 第57页 |
| ·创新点 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
