| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述及选题意义 | 第15-24页 |
| 1. 干扰素的概述 | 第15-20页 |
| ·干扰素的来源 | 第15页 |
| ·干扰素的分类 | 第15页 |
| ·干扰素的分子结构 | 第15-17页 |
| ·干扰素的产生 | 第17页 |
| ·干扰素的作用机制 | 第17-18页 |
| ·干扰素的生物学活性 | 第18-19页 |
| ·禽类干扰素的研究进展 | 第19页 |
| ·α干扰素应用状况 | 第19-20页 |
| 2. 新城疫病毒流行概况 | 第20-23页 |
| ·新城疫病毒概况 | 第20-21页 |
| ·新城疫流行情况 | 第21-22页 |
| ·诊断方法 | 第22页 |
| ·免疫学方法 | 第22页 |
| ·分子生物学方法 | 第22页 |
| ·防控 | 第22-23页 |
| 3. 本实验研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 试验内容 | 第24-48页 |
| 第一章 鸡α干扰素的原核表达 | 第24-39页 |
| 1. 材料 | 第24-26页 |
| ·菌种、质粒、毒株、鸡胚 | 第24页 |
| ·酶和试剂 | 第24页 |
| ·试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·LB培养基相关试剂配制 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE、凝胶电泳相关试剂配制 | 第24-25页 |
| ·蛋白表达相关的溶液配制 | 第25页 |
| ·包涵体洗涤的相关试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·藏鸡肝组织基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·chIFN-α基因开放阅读框(ORF)的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增反应体系 | 第26-27页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第27页 |
| ·PCR产物与PMD-19T载体连接 | 第27-28页 |
| ·Ecoli DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·鸡α干扰素成熟蛋白基因克隆 | 第29页 |
| ·成熟蛋白表达质粒PET32-ChIFN-α的构建 | 第29-31页 |
| ·酶切体系 | 第29-30页 |
| ·转入大肠杆菌DH5α感受态细胞感受态 | 第30-31页 |
| ·成熟蛋白的表达条件的优化 | 第31页 |
| ·确定最佳IPTG诱导浓度 | 第31页 |
| ·最佳诱导时间确定 | 第31页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第31页 |
| ·两种不同表达菌表达量的比较 | 第31页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·包涵体的洗涤(参考自文献) | 第31-32页 |
| ·包涵体的复性 | 第32页 |
| 3. 试验结果 | 第32-36页 |
| ·chIFN-α基因_开放阅读框(ORF)的扩增 | 第32-33页 |
| ·藏鸡IFN-α基因ORF的序列分析 | 第33页 |
| ·ch IFN-α成熟蛋白基因的扩增 | 第33页 |
| ·确定最佳IPTG诱导浓度 | 第33-34页 |
| ·最佳诱导时间确定 | 第34-35页 |
| ·最佳诱导温度 | 第35页 |
| ·两种不同表达菌的比较 | 第35-36页 |
| ·复性蛋白质的浓度 | 第36页 |
| 4. 讨论 | 第36-39页 |
| ·鸡α干扰素基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·关于包涵体的洗涤 | 第37页 |
| ·关于表达条件的优化 | 第37-39页 |
| 第二章 重组鸡α干扰素对新城疫病毒F48E9的复制影响 | 第39-48页 |
| 1. 材料 | 第39页 |
| ·毒株、鸡胚 | 第39页 |
| ·酶和试剂 | 第39页 |
| ·试剂的配制 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| 2. 方法 | 第39-41页 |
| ·重组鸡α干扰素在鸡胚成纤维细胞上对新城疫F48E9病毒复制的影响 | 第39-41页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制作 | 第39-40页 |
| ·F48E9病毒TCID_(50)的测定 | 第40页 |
| ·重组干扰素对病毒复制的影响以及活性测定 | 第40-41页 |
| ·重组鸡α干扰素在鸡胚中对新城疫F48E9病毒复制的影响 | 第41页 |
| ·新城疫F48E9病毒EID_(50)的测定 | 第41页 |
| ·重组干扰素在鸡胚中对F48E9复制的影响 | 第41页 |
| ·重组鸡α干扰素在鸡体内对F48E9复制的影响 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-46页 |
| ·重组鸡IFN-α在鸡胚成纤维细胞上的抗NDV生物学活性 | 第41-44页 |
| ·F48E9在CEF上的TCID_(50)值 | 第41-43页 |
| ·重组鸡cHIFN-α活性的测定 | 第43-44页 |
| ·重组IFN-α在鸡胚上的抗NDV的活性 | 第44-45页 |
| ·F48E9在鸡胚中的EID_(50)值的测定 | 第44页 |
| ·重组IFN-α在鸡胚上的抗NDV的活性 | 第44-45页 |
| ·重组α干扰素在鸡体内的抗NDV的活性 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·重组鸡α干扰素对NDV的抑制作用 | 第46页 |
| ·干扰素活性的测定 | 第46页 |
| ·鸡胚试验测定干扰素抗病毒效果 | 第46-47页 |
| ·对雏鸡保护力的试验 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录1 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
