| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 英文略缩词表 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 第一篇 文献综述 | 第22-56页 |
| 第一章 小反刍兽疫及其分子流行病学研究进展 | 第22-42页 |
| 1 流行特点 | 第22-23页 |
| ·易感动物 | 第22-23页 |
| ·传染源 | 第23页 |
| ·传播途径 | 第23页 |
| 2 临床症状 | 第23-24页 |
| 3 病理组织学变化 | 第24-26页 |
| ·病理变化 | 第24页 |
| ·组织学病变 | 第24-25页 |
| ·病毒的组织分布 | 第25-26页 |
| 4 病原 | 第26-28页 |
| ·N基因及多聚U序列 | 第26-27页 |
| ·P基因及CUU核苷酸 | 第27页 |
| ·M基因 | 第27页 |
| ·F基因 | 第27-28页 |
| ·H基因 | 第28页 |
| ·L基因 | 第28页 |
| 5 病毒蛋白及其功能 | 第28-32页 |
| ·N蛋白 | 第28-29页 |
| ·P蛋白及非结构蛋白 | 第29页 |
| ·M蛋白 | 第29-30页 |
| ·F蛋白 | 第30-31页 |
| ·H蛋白 | 第31页 |
| ·L蛋白 | 第31-32页 |
| 6 病毒复制 | 第32页 |
| 7 病毒培养 | 第32页 |
| 8 免疫原性 | 第32页 |
| 9 病毒的致病机理 | 第32-33页 |
| 10 病毒的防控 | 第33页 |
| 11 地理分布 | 第33-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 第二章 小反自兽疫检测方法及疫苗免疫研究进展 | 第42-56页 |
| 1 病原检测技术 | 第42-45页 |
| ·样品采集 | 第42页 |
| ·琼脂凝胶免疫扩散 | 第42页 |
| ·病毒分离 | 第42-43页 |
| ·对流免疫电泳 | 第43页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第43页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第43-44页 |
| ·PCR方法 | 第44-45页 |
| ·核酸识别方法 | 第45页 |
| ·其它检测病毒的技术 | 第45页 |
| 2 血清学诊断技术 | 第45-47页 |
| ·中和试验 | 第45页 |
| ·竞争性酶联免疫吸附试验 | 第45-47页 |
| 3 疫苗的研制 | 第47-50页 |
| ·传统疫苗的制备 | 第47-48页 |
| ·非感染性疫苗的制备 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 第二篇 试验研究 | 第56-134页 |
| 第一章 西藏株小反刍兽疫N基因的化学合成 | 第56-76页 |
| 1 材料与方法 | 第57-68页 |
| ·菌种与载体 | 第57页 |
| ·酶类和试剂盒 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·PPRVN基因序列的来源及改造 | 第57-58页 |
| ·引物的设计与合成 | 第58-63页 |
| ·引物的稀释与短片段DNA的合成 | 第63-64页 |
| ·PPRV-N部分片段基因的回收 | 第64页 |
| ·核酸浓度的测定 | 第64页 |
| ·全长N基因的合成 | 第64页 |
| ·小量胶回收试剂盒回收PCR产物PPRV-N基因 | 第64-65页 |
| ·N基因的克隆与测序 | 第65页 |
| ·转化 | 第65页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第65页 |
| ·定点突变引物的设计与合成 | 第65-66页 |
| ·序列的修正 | 第66-67页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳及透析袋回收 | 第67页 |
| ·回收DNA浓度的测定 | 第67页 |
| ·正确DNA序列的PCR拼接及克隆 | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-70页 |
| ·化学合成PPRV-N基因 | 第68页 |
| ·定点突变 | 第68-69页 |
| ·修正后的PPRV-N基因序列 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 第二章 N蛋白基因的克隆、表达、产物纯化及免疫性质鉴定 | 第76-90页 |
| 1 材料与方法 | 第76-82页 |
| ·载体与菌种 | 第76页 |
| ·酶类和试剂 | 第76-77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| ·PPRV-N基因的克隆 | 第77-79页 |
| ·PPRV-N基因的表达和条件优化 | 第79-80页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第80页 |
| ·蛋白含量测定与保存 | 第80页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第80-81页 |
| ·Western-blot | 第81-82页 |
| 2 结果 | 第82-86页 |
| ·表达载体的构建 | 第82页 |
| ·诱导条件的优化 | 第82-84页 |
| ·表达和纯化的PPRV-N蛋白 | 第84页 |
| ·Western blot结果 | 第84-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 4 小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-90页 |
| 第三章 小反刍兽疫间接ELISA方法的建立及与商品化试剂盒检测对比 | 第90-102页 |
| 1 材料与方法 | 第90-93页 |
| ·抗原的准备 | 第90-91页 |
| ·酶及试剂 | 第91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·商品化竞争ELISA试剂盒检测PPRV血清抗体 | 第91页 |
| ·原核表达N蛋白替代商品化试剂盒中重组B-N抗原 | 第91页 |
| ·血清样品 | 第91页 |
| ·间接ELISA的设计 | 第91-92页 |
| ·最佳化间接ELISA | 第92页 |
| ·阈值的确定 | 第92-93页 |
| ·间接ELISA的敏感性和重复性评估 | 第93页 |
| 2 结果 | 第93-97页 |
| ·原核表达N蛋白替代商品化试剂盒中重组B-N抗原的样品抑制率差异 | 第93页 |
| ·间接ELISA抗原和抗体的工作浓度 | 第93页 |
| ·间接ELISA重复性 | 第93-96页 |
| ·间接ELISA的阈值以及特异性和敏感性 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 4 小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第四章 单表位多肽抗血清的制备及免疫性质鉴定 | 第102-114页 |
| 1 材料与方法 | 第102-104页 |
| ·抗原的准备 | 第102-103页 |
| ·试剂及抗体 | 第103页 |
| ·主要仪器 | 第103页 |
| ·多肽和PPRV抗体及RPV抗体的结合力的间接ELISA检测 | 第103页 |
| ·动物免疫 | 第103-104页 |
| ·抗体的纯化 | 第104页 |
| ·抗体效价测定 | 第104页 |
| ·间接ELISA检测单表位抗体与抗原的结合能力 | 第104页 |
| 2 结果 | 第104-109页 |
| ·多肽和PPRV抗体及RPV抗体的结合力的间接ELISA检测 | 第104-106页 |
| ·抗体滴度的确定 | 第106-109页 |
| 3 讨论 | 第109-110页 |
| 4 小结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-114页 |
| 第五章 小反刍兽疫抗血清检测的竞争ELISA方法的建立 | 第114-128页 |
| 1 材料与方法 | 第114-117页 |
| ·抗原、竞争抗体的准备 | 第114-115页 |
| ·试剂 | 第115页 |
| ·主要仪器 | 第115页 |
| ·血清样品 | 第115页 |
| ·竞争ELISA | 第115-116页 |
| ·最佳化反应条件 | 第116-117页 |
| ·阈值的确定 | 第117页 |
| ·对比两种竞争ELISA方法 | 第117页 |
| ·重复性试验 | 第117页 |
| ·PPRV自然感染与疫苗免疫的抗体水平差异及敏感性测试 | 第117页 |
| 2 结果 | 第117-121页 |
| ·最佳化竞争ELISA | 第117-118页 |
| ·阈值的确定 | 第118页 |
| ·敏感性和特异性对比 | 第118-120页 |
| ·重复性试验 | 第120页 |
| ·PPRV自然感染与疫苗免疫的抗体水平差异及敏感性测试 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-123页 |
| 4 小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 第六章 竞争ELISA检测小反刍兽疫抗体水平 | 第128-134页 |
| 1 材料与方法 | 第128页 |
| ·血清 | 第128页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第128页 |
| ·竞争ELISA试验步骤 | 第128页 |
| 2 结果 | 第128-130页 |
| ·各地血清抗体阳性率 | 第128-129页 |
| ·各地血清抗体水平 | 第129-130页 |
| 3 讨论 | 第130-131页 |
| 4 小结 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-134页 |
| 总体讨论 | 第134-138页 |
| 参考文献 | 第138-140页 |
| 全文结论 | 第140-142页 |
| 本文创新点 | 第142-144页 |
| 附录 | 第144-150页 |
| 致谢 | 第150-152页 |
| 攻读博士期间申请的国家专利 | 第152-154页 |
| 攻读博士期间发表和完成的论文 | 第154页 |
