| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-22页 |
| ·研究背景 | 第11-12页 |
| ·核糖核酸酶简介 | 第12页 |
| ·牛精子核糖核酸酶和血管生成素 | 第12-14页 |
| ·豹蛙酶的概述 | 第14-18页 |
| ·豹蛙酶结构特点及稳定性 | 第14-15页 |
| ·豹蛙酶催化活性及细胞毒性 | 第15-16页 |
| ·豹蛙酶进入细胞的途径 | 第16-17页 |
| ·豹蛙酶的抗肿瘤性 | 第17-18页 |
| ·斑蝥素概述 | 第18-19页 |
| ·蝎氯毒素概述 | 第19-22页 |
| ·蝎氯毒素来源及毒性 | 第19页 |
| ·蝎氯毒素结构特点 | 第19-20页 |
| ·蝎氯毒素的作用机制 | 第20-21页 |
| ·蝎氯毒素的展望 | 第21-22页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·质粒和菌株 | 第22页 |
| ·细胞和培养液 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要设备 | 第22页 |
| ·主要培养基 | 第22-23页 |
| ·主要溶液及缓冲液 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·感受态制备 | 第25页 |
| ·感受态转化及保藏菌种 | 第25-26页 |
| ·抽提质粒(碱裂解法) | 第26页 |
| ·SDS-PAGE凝胶蛋白电泳 | 第26-27页 |
| ·Western Blot | 第27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·MTT法检测蛋白对肿瘤细胞的毒性 | 第27-28页 |
| ·豹蛙酶蛋白表达 | 第28页 |
| ·菌体破碎与包涵体洗涤 | 第28-29页 |
| ·包涵体蛋白的溶解和复性 | 第29页 |
| ·豹蛙酶蛋白纯化 | 第29-30页 |
| ·豹蛙酶蛋白活性检测 | 第30页 |
| ·融合蛋白ONC-CTX的制备及其活性检测 | 第30页 |
| ·融合蛋白ONC-CTX竞争性实验 | 第30-31页 |
| ·豹蛙酶与斑蝥酸钠的联合作用 | 第31-32页 |
| 第3章 豹蛙酶发酵及纯化工艺研究 | 第32-42页 |
| ·发酵条件优化 | 第32-37页 |
| ·测定菌体生长曲线 | 第32-33页 |
| ·接种量的影响 | 第33-34页 |
| ·IPTG诱导物的影响 | 第34-35页 |
| ·诱导时间的影响 | 第35页 |
| ·大量表达豹蛙酶 | 第35-37页 |
| ·包涵体洗涤及溶解 | 第37-38页 |
| ·蛋白复性及纯化 | 第38-40页 |
| ·蛋白豹蛙酶的复性 | 第38页 |
| ·蛋白豹蛙酶的纯化 | 第38-40页 |
| ·细胞毒性检测 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 豹蛙酶与斑蝥酸协同作用 | 第42-48页 |
| ·豹蛙酶对肺腺癌细胞株杀伤作用 | 第42-44页 |
| ·斑蝥酸钠对肺腺癌细胞株杀伤作用 | 第44-45页 |
| ·豹蛙酶和斑蝥酸钠协同作用 | 第45-48页 |
| 第5章 融合蛋白ONC-CTX的制备及靶向活性检测 | 第48-61页 |
| ·融合蛋白ONC-CTX表达 | 第48-50页 |
| ·菌体破碎和包涵体洗涤 | 第50-51页 |
| ·蛋白复性和纯化 | 第51-55页 |
| ·融合蛋白靶向性 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白活性 | 第56-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 结论和展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |