| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 绪论 | 第11-20页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·研究背景 | 第12-17页 |
| ·羧酸酯酶的命名与分类 | 第12页 |
| ·羧酸酯酶的分布与功能 | 第12-13页 |
| ·昆虫羧酸酯酶的结构，功能以及催化原理 | 第13-15页 |
| ·羧酸酯酶的底物特异性 | 第15页 |
| ·昆虫羧酸酯酶在害虫防治中的应用前景 | 第15-17页 |
| ·昆虫羧酸酯酶的研究现状 | 第17页 |
| ·研究目的与意义 | 第17-18页 |
| ·研究的主要内容与技术路线 | 第18-20页 |
| ·研究内容 | 第18页 |
| ·技术路线 | 第18-20页 |
| 2 家蚕羧酸酯酶基因 Bmae33 的克隆、序列分析及诱导表达分析 | 第20-33页 |
| ·试验材料与所用试剂 | 第20-22页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂及配方 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-25页 |
| ·Bmae33 基因的生物信息学分析 | 第22页 |
| ·总 RNA 的提取及检测 | 第22-23页 |
| ·cDNA 的制备和检测 | 第23-24页 |
| ·Bmae33 基因的克隆 | 第24页 |
| ·Bmae33 基因在家蚕中的组织表达情况分析 | 第24页 |
| ·辛硫磷诱导 Bmae33 基因的表达模式分析 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-31页 |
| ·Bmae33 基因的生物信息学分析 | 第25-29页 |
| ·Bmae33 基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·Bmae33 基因在家蚕各个组织的表达情况分析 | 第30页 |
| ·辛硫磷诱导的 Bmae33 基因表达变化 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 3 家蚕 Bmae33 基因的原核表达与抗体制备 | 第33-44页 |
| ·试剂与材料 | 第33-37页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·溶液配制 | 第34-37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·家蚕 Bmae33 基因重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·家蚕 Bmae33 基因的原核表达以及鉴定 | 第38-39页 |
| ·Bmae33 重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组表达蛋白的 Western blotting 检测 | 第40-41页 |
| ·多克隆抗体的制备与检测 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·蛋白诱导表达，纯化与检测 | 第42-43页 |
| ·多克隆抗体的制备与检测 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 4 家蚕 Bmae33 基因的真核表达 | 第44-56页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·试剂配制 | 第44-46页 |
| ·实验方法与步骤 | 第46-50页 |
| ·目的基因 Bmae33 片段的获得 | 第46页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·重组毕赤酵母表达重组子的制备 | 第47-49页 |
| ·表达上清的浓缩处理与 SDS-PAGE 检测 | 第49页 |
| ·Western blotting 检测表达产物 | 第49页 |
| ·Bmae33 基因序列优化与重组表达载体构建 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-55页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·重组表达载体的线性化处理 | 第51页 |
| ·Bmae33/pPIC9K 在毕赤酵母表型筛选及鉴定 | 第51-52页 |
| ·Bmae33/pPIC9K 的诱导表达以及 Western blotting 检测 | 第52页 |
| ·Bmae33 基因序列的优化 | 第52-54页 |
| ·Bmae33 优化后基因的克隆 | 第54页 |
| ·序列优化后的重组表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 5 结论与展望 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| A. 原核表达载体 pET-28a(+)图谱 | 第64-65页 |
| B. 真核表达载体 pPIC9K 图谱 | 第65-67页 |
| C. 硕士期间发表及参与发表的论文 | 第67页 |
