| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 插图索引 | 第10-11页 |
| 附表索引 | 第11-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-17页 |
| ·生物能源现状及生产燃料乙醇酵母基因工程菌的研究 | 第13-15页 |
| ·生物能源现状 | 第13页 |
| ·燃料乙醇开发的发展状况 | 第13-15页 |
| ·SPT15 基因 | 第15页 |
| ·方法背景 | 第15-16页 |
| ·本文构想 | 第16-17页 |
| 第2章 构建含有SPT15 基因的PYES2 质粒 | 第17-32页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·微生物菌种 | 第17页 |
| ·质粒来源 | 第17页 |
| ·工具酶和试剂 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17-18页 |
| ·试剂配制 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-25页 |
| ·PCR 扩增目的基因SPT15 | 第19-20页 |
| ·PCR 扩增目的片段的纯化 | 第20-21页 |
| ·SPT15 基因克隆载体的构建 | 第21-25页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第25-26页 |
| ·测序质粒PYES2-SPT15 的鉴定结果 | 第26页 |
| ·核苷酸序列测定及同源性分析 | 第26-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| ·PCR 特异性反应 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第30页 |
| ·菌落PCR 及LETR 法各自鉴定阳性克隆的优势 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第3章 构建含有SPT15 基因、半乳糖启动子片段的Ycplac22 质粒 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·质粒 | 第32页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·PCR 扩增目的基因SPT15 | 第32页 |
| ·表达重组质粒Ycplac22-SPT15 的构建 | 第32-33页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第33页 |
| ·PCR 扩增半乳糖启动子 | 第33页 |
| ·PCR 扩增半乳糖启动子的纯化 | 第33页 |
| ·Ycplac22-SPT15-GALⅠpromoter 基因克隆载体的构建 | 第33-35页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-40页 |
| ·PCR 扩增目的基因SPT15 | 第35页 |
| ·测序质粒Ycplac22-SPT15 的鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·核苷酸序列测定及同源性分析 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增半乳糖启动子 | 第37-38页 |
| ·测序质粒Ycplac22-GALⅠpromoter-SPT15 的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·核苷酸序列测定及同源性分析 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第4章 Mn~(2+)对不同长度DNA 片段随机突变影响 | 第41-55页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第41页 |
| ·PCR 测序引物 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·提取提取PYES2-SPT15 质粒 | 第42页 |
| ·用融合PCR 方法扩增无突变的SPT15 目的基因 | 第42-43页 |
| ·用融合PCR 方法扩增2236p 突变的spt15 目的基因 | 第43页 |
| ·用融合PCR 方法扩增5006p 突变的spt15 目的基因 | 第43-44页 |
| ·M112+对7236p DNA 片段随机突变影响 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-53页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第45-49页 |
| ·测序质粒PYES2-spt15 的鉴定结果 | 第49-52页 |
| ·核苷酸序列测定及同源性分析 | 第52页 |
| ·突变序列的测定总结 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53页 |
| ·锰离子对基因随机突变的影响 | 第53页 |
| ·融合PCR | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第5章 大肠杆菌高转化效率的探索 | 第55-60页 |
| ·溶液配制 | 第55页 |
| ·热激转化大肠杆菌的效率探索 | 第55-57页 |
| ·大肠杆菌的制备 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第56-57页 |
| ·电转化大肠杆菌的效率探索 | 第57-58页 |
| ·仪器参数的研究 | 第57-58页 |
| ·质粒含量对电转化效率的影响 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-60页 |
| ·热激转化的分析 | 第58页 |
| ·电转化实验结果及分析 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
