| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-26页 |
| 1 蛋白质的热稳定性 | 第9-15页 |
| ·蛋白质的热稳定性 | 第9-12页 |
| ·氨基酸组成对蛋白质热稳定性的影响 | 第10页 |
| ·分子内作用力对蛋白质热稳定的影响 | 第10-11页 |
| ·蛋白质的构型对蛋白质热稳定性的影响 | 第11-12页 |
| ·提高蛋白质热稳定性的方法 | 第12-15页 |
| ·突变技术 | 第12-13页 |
| ·化学修饰 | 第13页 |
| ·定向进化 | 第13页 |
| ·添加稳定剂 | 第13-14页 |
| ·翻译后修饰 | 第14页 |
| ·其它方法 | 第14-15页 |
| 2. 蛋白质的环化 | 第15-24页 |
| ·环化蛋白质的结构特点 | 第15-17页 |
| ·细菌中的环化蛋白 | 第15-16页 |
| ·植物中的环化蛋白 | 第16-17页 |
| ·哺乳动物中的环化蛋白 | 第17页 |
| ·蛋白质环化的方法 | 第17-21页 |
| ·天然化学连接 | 第17-18页 |
| ·内含肽环化 | 第18-21页 |
| ·顺式剪接反应 | 第19-20页 |
| ·反式剪接反应 | 第20页 |
| ·表达蛋白环化 | 第20-21页 |
| ·Sortase A 介导的环化反应 | 第21-24页 |
| ·转肽酶Sortase A 的特性 | 第21-23页 |
| ·Sortase A 介导的环化反应 | 第23-24页 |
| 展望 | 第24-26页 |
| 第二章 环化蛋白的热稳定研究 | 第26-57页 |
| 1. 引言 | 第26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-31页 |
| ·试剂及配方 | 第26-30页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第31-32页 |
| ·突变pTWIN 载体 | 第32-34页 |
| ·构建pTWIN-M-GFP 表达亚克隆 | 第34-35页 |
| ·构建pTWIN-M-APE RNase HⅡ表达亚克隆 | 第35-37页 |
| ·非变性纯化GFP（几丁质柱） | 第37-38页 |
| ·非变性纯化APE RNase HⅡ（几丁质柱.） | 第38页 |
| ·非变性纯化Sortase A（Ni 柱） | 第38-39页 |
| ·GFP 的环化反应 | 第39页 |
| ·APE RNase HⅡ的环化反应 | 第39页 |
| ·环化GFP 反应产物去除Sortase A | 第39页 |
| ·环化APE RNase HⅡ反应产物去除Sortase A | 第39-40页 |
| ·环化GFP 热稳定性检测 | 第40页 |
| ·环化APE RNase HⅡ的测活反应 | 第40页 |
| ·环化APE RNase HⅡ的在检测SNP 位点中的应用 | 第40-42页 |
| ·提取人基因组DNA | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增HLA（人类白细胞抗原）序列 | 第41页 |
| ·胶回收纯化HLA 片段 | 第41-42页 |
| ·环化APE RNase HⅡ对SNP 位点的检测 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-52页 |
| ·表达载体pTWIN 的突变 | 第42-43页 |
| ·相关蛋白质的纯化 | 第43-46页 |
| ·转肽酶Sortase A 的纯化 | 第43-45页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP 的纯化 | 第45页 |
| ·核糖核酸酶APE RNase HⅡ的纯化 | 第45-46页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP 的环化 | 第46-47页 |
| ·环化GFP 的热稳定性分析 | 第47-48页 |
| ·核糖核酸酶APE RNase HⅡ的环化 | 第48-49页 |
| ·环化APE RNase HⅡ的热稳定性分析 | 第49-50页 |
| ·环化APE RNase HⅡ的应用 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| ·转肽酶Sortase A 介导的蛋白质环化 | 第52-53页 |
| ·蛋白质的稳定性 | 第53-55页 |
| 5 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 硕士期间发表专利 | 第64-67页 |
| 上海交通大学硕士学位论文答辩决议书 | 第67页 |
