| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一章 野生型ATP13A2以及KRS相关突变体的亚细胞定位 | 第18-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·材料与试剂 | 第19页 |
| ·试剂配置 | 第19页 |
| 2. 方法 | 第19-22页 |
| ·质粒 | 第19页 |
| ·稳定表达ATP13A2WT,Del C,SKP13,DUP22突变体HEK #293细胞系和N2A细胞系的获得 | 第19-20页 |
| ·大鼠海马神经元的原代培养 | 第20页 |
| ·大鼠原代神经元的转染[48] | 第20页 |
| ·用免疫印迹法鉴定ATP13A2的表达 | 第20页 |
| ·免疫荧光鉴定ATP13A2的表达 | 第20-21页 |
| ·ATP13A2蛋白亚细胞定位 | 第21-22页 |
| 3. 结果 | 第22-31页 |
| ·稳定表达细胞系的获得 | 第22-23页 |
| ·大鼠神经元的原代培养 | 第23页 |
| ·野生型ATP13A2与各细胞器的共定位 | 第23-27页 |
| ·ATP13A2 KRS相关突变体与各细胞器的共定位 | 第27-29页 |
| ·ATP13A2WT及KRS相关突变体在神经元中的定位 | 第29-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第二章 ATP13A2降解途径和半衰期 | 第32-44页 |
| 1. 主要仪器 | 第32页 |
| 2. 方法 | 第32-35页 |
| ·ATP13A2野生型及疾病相关突变体降解途径的确定 | 第32页 |
| ·ATP13A2野生型及疾病相关突变体半衰期的确定 | 第32-33页 |
| ·ATP13A2,Del C,SKP13,DUP22突变体蛋白对内质网应激蛋白Bip,自噬相关蛋白LC3和GAPDH的影响 | 第33页 |
| ·稳定表达Synphilin-GFP HEK293细胞系的获得 | 第33-34页 |
| ·ATP13A2对稳定表达Synphilin-GFP的影响 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-42页 |
| ·ATP13A2WT和KRS相关突变体的降解途径 | 第35页 |
| ·ATP13A2WT及KRS相关突变体半衰期的确定 | 第35-36页 |
| ·ATP13A2 KRS相关突变体对内质网应激的影响 | 第36-38页 |
| ·ATP13A2 KRS相关突变体对自噬溶酶体功能的影响 | 第38-40页 |
| ·ATP13A2 KRS相关突变体对蛋白酶体功能的影响 | 第40-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 ATP13A2与α-synuclein | 第44-54页 |
| 1. 材料与试剂 | 第44页 |
| 2. 方法 | 第44-46页 |
| ·α-synuclein与ATP13A2的共定位实验 | 第44页 |
| ·ATP13A2对α-synuclein寡聚体和单体的影响实验 | 第44-45页 |
| ·ATP13A2对TritonX-100可溶性与不可溶性α-synuclein的影响实验 | 第45-46页 |
| 3. 结果 | 第46-52页 |
| ·α-synuclein与ATP13A2的共定位 | 第46页 |
| ·ATP13A2对α-synuclein寡聚体的影响 | 第46-49页 |
| ·ATP13A2对TritonX-100可溶性与不可溶性α-synuclein的影响 | 第49-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 ATP13A2抵抗锰离子导致的细胞毒性 | 第54-71页 |
| 1. 实验仪器 | 第54页 |
| 2. 方法 | 第54-56页 |
| ·DNA Ladder检测 | 第54页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第54-55页 |
| ·细胞内Mn含量的检测 | 第55页 |
| ·Real-time PCR | 第55页 |
| ·细胞色素c释放 | 第55-56页 |
| 3. 结果 | 第56-67页 |
| ·Mn~(2+)对细胞的毒性作用 | 第56页 |
| ·ATP13A2WT抵抗Mn~(2+)导致的细胞凋亡 | 第56-61页 |
| ·ATP13A2WT引起细胞内Mn~(2+)浓度降低 | 第61-62页 |
| ·Mn~(2+)诱导细胞内ATP13A2 mRNA表达增加 | 第62-64页 |
| ·ATP13A2WT抵抗Mn~(2+)诱导的细胞色素c的释放 | 第64页 |
| ·ATP13A2在Mn~(2+)存在的情况下,并不影响α-synuclein的表达 | 第64-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-71页 |
| 第五章 ATP13A2过表达所致的全基因组表达谱变化 | 第71-89页 |
| 1. 实验材料 | 第71页 |
| 2. 方法 | 第71-74页 |
| ·HEK293稳定表达细胞系的建立 | 第71页 |
| ·稳定细胞系的鉴定 | 第71页 |
| ·RNA提取 | 第71页 |
| ·RNA的纯化 | 第71-72页 |
| ·芯片杂交 | 第72页 |
| ·基因芯片结果验证 | 第72-73页 |
| ·芯片结果分析 | 第73-74页 |
| 3. 结果 | 第74-87页 |
| ·稳定表达ATP13A2WT和KRS突变体细胞的鉴定 | 第74页 |
| ·ATP13A2 KRS相关突变体与对照组相比差异基因的获得 | 第74-77页 |
| ·差异基因的验证 | 第77-79页 |
| ·生物信息学分析ATP13A2 KRS相关突变体所致的差异基因 | 第79-83页 |
| ·ATP13A2WT过表达所致的差异基因获得 | 第83-85页 |
| ·生物信息学分析ATP13A2WT过表达所致的差异基因 | 第85-87页 |
| 4. 讨论 | 第87-89页 |
| 总结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-105页 |
| 综述 | 第105-125页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第126页 |
