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雨生红球藻光受体基因克隆及HpChR1与HpCRY4生物学功能研究

摘要第3-5页
Abstract第5-7页
第一章 绪论第14-51页
    1.1 雨生红球藻概述第14页
    1.2 雨生红球藻的生活周期及生殖方式第14-15页
    1.3 雨生红球藻的最主要营养方式第15页
    1.4 虾青素的理化性质第15-16页
    1.5 虾青素的来源第16-17页
        1.5.1 化学合成第16-17页
        1.5.2 天然虾青素第17页
    1.6 虾青素的生物学功能及应用第17-20页
    1.7 雨生红球藻内虾青素合成的机制第20-21页
    1.8 影响雨生红球藻产虾青素的主要因素第21-25页
        1.8.1 光第21-24页
        1.8.2 营养元素第24-25页
        1.8.3 温度第25页
        1.8.4 酸碱度第25页
    1.9 光受体研究进展第25-27页
    1.10 藻类光受体研究进展第27-45页
        1.10.1 光-氧-电压(LOV)结构域类光受体第27-33页
        1.10.2 隐花色素第33-38页
        1.10.3 光敏色素第38-39页
        1.10.4 类视紫红质光受体第39-45页
        1.10.5 紫外光受体第45页
    1.11 光敏组件在合成生物学和神经生物学中的应用第45-50页
    1.12 研究目的、内容及创新性第50-51页
第二章 光照对雨生红球藻生物学特性影响的研究第51-64页
    引言第51页
    2.1 实验材料与方法第51-56页
        2.1.1 实验材料第51-53页
            2.1.1.1 藻种和培养条件第51页
            2.1.1.2 主要试剂第51-52页
            2.1.1.3 主要仪器与设备第52-53页
        2.1.2 实验方法第53-56页
            2.1.2.1 培养基的配制第53-55页
            2.1.2.2 雨生红球藻的培养及细胞生长情况测定第55页
            2.1.2.3 雨生红球藻光合作用相关指标的测定第55页
            2.1.2.4 雨生红球藻细胞中色素含量的测定第55-56页
    2.2 结果与分析第56-60页
        2.2.1 光质对雨生红球藻生长速率的影响第56-57页
        2.2.2 不同光质对雨生红球藻细胞最大光合效率的影响第57-58页
        2.2.3 不同光质对雨生红球藻实际光合效率的影响第58页
        2.2.4 不同光质对雨生红球藻叶绿素含量的影响第58-59页
        2.2.5 不同光质对雨生红球藻中虾青素含量的影响第59-60页
    2.3 讨论第60-64页
第三章 雨生红球藻光受体蛋白的基因克隆及分析第64-111页
    引言第64页
    3.1 实验材料与方法第64-81页
        3.1.1 实验材料第64-66页
            3.1.1.1 藻种和培养条件第64-65页
            3.1.1.2 主要试剂第65页
            3.1.1.3 主要仪器第65-66页
        3.1.2 实验方法第66-81页
            3.1.2.1 试剂的配制第66-67页
            3.1.2.2 雨生红球藻总RNA的提取及反转第67-68页
            3.1.2.3 雨生红球藻中光受体序列的预测第68-69页
            3.1.2.4 SMART RACE模板cDNA合成第69-76页
            3.1.2.5 PCR产物回收纯化及浓度测定第76-77页
            3.1.2.6 目的基因与T载体连接及转化第77-79页
            3.1.2.7 实时荧光定量PCR检测光受体基因表达第79-81页
            3.1.2.8 生物信息学分析方法第81页
    3.2 结果与分析第81-109页
        3.2.1 雨生红球藻光受体基因预测结果第81-82页
        3.2.2 雨生红球藻光受体基因开放阅读框的克隆第82-84页
        3.2.3 HpChR1基因的克隆与序列分析第84-92页
        3.2.4 HpHKR2 基因的克隆与序列分析第92-97页
        3.2.5 HpCRY4基因的克隆与序列分析第97-104页
        3.2.6 HpUV-B基因的克隆与序列分析第104-108页
        3.2.7 不同光照条件下光受体基因的表达第108-109页
    3.3 结论第109-111页
第四章 雨生红球藻HpChR1基因功能研究第111-143页
    引言第111页
    4.1 实验材料与方法第111-127页
        4.1.1 实验材料第111-114页
            4.1.1.1 菌株及质粒第111页
            4.1.1.2 主要试剂第111-113页
            4.1.1.3 主要仪器第113-114页
        4.1.2 实验方法第114-127页
            4.1.2.1 试剂的配制第114-118页
            4.1.2.2 质粒抽提与载体构建第118-120页
            4.1.2.3 目的蛋白得诱导表达及纯化第120-124页
            4.1.2.5 宫颈癌(Hela)细胞培养及目的基因转染第124-127页
    4.2 实验结果与分析第127-136页
        4.2.1 HpChR1蛋白的原核表达及纯化第127-129页
        4.2.2 HpChR1蛋白互作蛋白筛选第129-131页
        4.2.3 HpChR1蛋白与COP1蛋白的互作研究第131-132页
        4.2.4 HpChR1蛋白的亚细胞定位研究第132-134页
        4.2.5 HpChR1蛋白的钙离子通道功能验证第134-136页
    4.3 讨论第136-142页
        4.3.1 HpChR1是一种重要的通道视紫红质第136-138页
        4.3.2 HpChR1互作蛋白的研究第138-140页
        4.3.3 HpChR1的功能假说第140-142页
    4.4 结论第142-143页
第五章 雨生红球藻HpCRY4基因功能研究第143-150页
    引言第143页
    5.1 实验材料与方法第143-144页
        5.1.1 实验材料第143页
            5.1.1.1 菌株及质粒第143页
            5.1.1.2 主要试剂与仪器第143页
        5.1.2 实验方法第143-144页
            5.1.2.1 细胞周期同步处理第143-144页
    5.2 实验结果与分析第144-147页
        5.2.1 HpCRY4蛋白与COP1蛋白的互作研究第144页
        5.2.2 HpCRY4蛋白的亚细胞定位研究第144-145页
        5.2.3 HpCRY4蛋白与细胞周期相关性研究第145-146页
        5.2.4 HpCRY4的亚细胞定位与其赖氨酸位点相关性研究第146-147页
    5.3 讨论第147-149页
        5.3.1 HpCRY4在细胞周期中的时序分布第147-148页
        5.3.2 HpCRY4在细胞周期进程中的调控和功能第148-149页
    5.4 结论第149-150页
第六章 总结与展望第150-152页
    6.1 结论第150页
    6.2 展望第150-152页
参考文献第152-163页
附录第163-175页
致谢第175-176页
攻读博士学位期间的研究成果第176页

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