粟酒裂殖酵母线粒体RNA聚合酶Rpo41及线粒体转录因子Mtf1的表达、纯化与结晶研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第7-8页 |
| 一 引言 | 第8-20页 |
| ·线粒体概述 | 第8-12页 |
| ·线粒体基因组的结构特点 | 第8-9页 |
| ·线粒体基因组与核基因组的相互关系 | 第9-10页 |
| ·mtDNA遗传学特征 | 第10-12页 |
| ·线粒体与疾病 | 第12页 |
| ·线粒体RNA聚合酶mtRNAP的研究背景 | 第12-17页 |
| ·酶核心组分Rpo41 | 第13-15页 |
| ·线粒体转录因子Mtf1 | 第15-17页 |
| ·Rpo41和Mtf1蛋白的初步分析 | 第17-19页 |
| ·本课题的主要研究内容、目的、意义及创新点 | 第19-20页 |
| 二 实验材料与方法 | 第20-38页 |
| ·实验材料 | 第20-25页 |
| ·基因、酶类及基本材料 | 第20页 |
| ·常用菌株 | 第20页 |
| ·常用试剂 | 第20-21页 |
| ·载体 | 第21页 |
| ·常用缓冲液及自备试剂 | 第21-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-38页 |
| ·构建原核表达载体 | 第25-28页 |
| ·小量蛋白的表达及纯化 | 第28-29页 |
| ·大规模发酵提取蛋白复合物 | 第29-30页 |
| ·3C限制性蛋白酶切 | 第30页 |
| ·蛋白质的离子交换层析纯化 | 第30-31页 |
| ·蛋白的分子筛层析纯化 | 第31页 |
| ·蛋白质的保存 | 第31页 |
| ·Rpo41不同突变体的构建 | 第31-36页 |
| ·启动子DNA | 第36页 |
| ·蛋白质复合物及启动子DNA的结晶及优化 | 第36-38页 |
| 三 结果与讨论 | 第38-57页 |
| ·Rpo41和Mtf1的表达与纯化结果 | 第38-54页 |
| ·全长Rpo41 | 第38-40页 |
| ·全长Mtf1 | 第40-43页 |
| ·全长Rpo41和全长Mtf1 | 第43-46页 |
| ·Rpo41构建和全长Mtf1复合物 | 第46-54页 |
| ·Rpo41降解条带质谱分析结果 | 第54-55页 |
| ·结晶与结构解析结果 | 第55-57页 |
| 四 结论 | 第57-58页 |
| 五 参考文献 | 第58-63页 |
| 六 致谢 | 第63-64页 |
| 在学期间发表论文及所获奖励 | 第64-65页 |
