| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| ·研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| ·国内外研究现状 | 第15-24页 |
| ·高等植物的氮素营养 | 第15-16页 |
| ·氮素在高等植物中的生理功能 | 第15页 |
| ·植物对氮素的吸收 | 第15-16页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶的研究现状 | 第16-21页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶的结构及分布 | 第17页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶基因分子生物学研究现状 | 第17-20页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶表达调控研究现状 | 第20-21页 |
| ·植物基因克隆技术研究现状 | 第21-22页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的生物信息学研究现状 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·供试品种 | 第24页 |
| ·主要分子和生化试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·试验设计 | 第24-27页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·试验研究方法 | 第25-26页 |
| ·基因克隆及序列分析 | 第25页 |
| ·基因的表达分析 | 第25-26页 |
| ·试验技术路线 | 第26-27页 |
| ·主要试验方法 | 第27-37页 |
| ·GS1 和GS2 cDNA 的克隆及序列分析 | 第27-32页 |
| ·实验材料甜菜的用前准备 | 第27页 |
| ·甜菜叶片总RNA 的抽提 | 第27页 |
| ·甜菜总RNA 的电泳检测 | 第27页 |
| ·RNA 的消化，去除DNA（参照DNaseⅠ的说明书） | 第27-28页 |
| ·RNA 的定量及完整性分析 | 第28页 |
| ·反转录合成cDNA 的第一链（参照SuperScriptⅢ反转录酶的使用说明书） | 第28页 |
| ·用RT-PCR 的方法获得G51mRNA 编码区片段 | 第28页 |
| ·用RT-PCR 的方法获得G52mRNA 编码区片段 | 第28页 |
| ·G51mRNA 和G52mRNA 片段的胶回收（参照TaKaRa 胶回收纯化试剂盒的说明书） | 第28-29页 |
| ·目的片段与载体的连接与转化 | 第29-30页 |
| ·阳性重组子的蓝白斑筛选及培养 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第31页 |
| ·载体中插入片段PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·测序 | 第31页 |
| ·分子生物学分析 | 第31-32页 |
| ·GS2 基因组DNA 的克隆及序列分析 | 第32-35页 |
| ·供试品种用前准备 | 第32页 |
| ·采取CTAB 法提取基因组DNA | 第32页 |
| ·基因组DNA（gDNA）的完整性分析 | 第32页 |
| ·GS2 gDNA 5′end 的PCR 扩增. | 第32页 |
| ·GS2 gDNA 3′end 的PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·GS2 gDNA 全长的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第33-34页 |
| ·连接与转化 | 第34页 |
| ·阳性重组子的蓝白筛选及培养 | 第34页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第34页 |
| ·载体中插入片段双酶切验证 | 第34页 |
| ·载体中插入片段PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·测序 | 第34-35页 |
| ·氮素对甜菜GS 活力及基因表达的影响 | 第35-36页 |
| ·GS 活力的测定(参照李彩凤，2003). | 第35页 |
| ·甜菜叶片总RNA 提取和检测 | 第35页 |
| ·反转录（RT）合成cDNA | 第35页 |
| ·半定量PCR 反应 | 第35-36页 |
| ·氮素诱导后放线菌素D 和放线菌酮对甜菜GS 活力及基因表达的影响 | 第36-37页 |
| ·GS 活力的测定 | 第36页 |
| ·甜菜叶片总RNA 提取和检测 | 第36页 |
| ·反转录（RT）合成cDNA | 第36页 |
| ·半定量PCR 反应 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-61页 |
| ·甜菜GS1CDNA 和GS2CDNA 基因的克隆 | 第37-49页 |
| ·甜菜总RNA 的提取及检测 | 第37页 |
| ·GS1cDNA 和GS2cDNA 基因的获得 | 第37-39页 |
| ·GS1cDNA 和GS2cDNA 基因的生物信息学分析 | 第39-49页 |
| ·蛋白质的同源性检索及系统发生进化树分析 | 第39-44页 |
| ·GS1 和GS2 编码蛋白一级结构序列分析 | 第44-45页 |
| ·GS1 和GS2 蛋白质的二级结构预测 | 第45-47页 |
| ·GS1 和GS2 蛋白质的立体结构预测 | 第47-49页 |
| ·GS1 和GS2 蛋白质的功能结构域分析 | 第49页 |
| ·甜菜GS2 DNA 基因的克隆 | 第49-53页 |
| ·甜菜总DNA 的提取及检测 | 第49-50页 |
| ·GS2DNA 基因的获得. | 第50-53页 |
| ·甜菜GS 基因的表达分析 | 第53-61页 |
| ·氮素对甜菜GS 基因表达的影响 | 第53-55页 |
| ·不同氮素处理下甜菜叶片GS 活性的变化 | 第53-54页 |
| ·不同氮素处理下甜菜叶片GS1mRNA 的变化 | 第54-55页 |
| ·不同氮素处理下甜菜叶片GS2mRNA 的变化 | 第55页 |
| ·氮素诱导后核酸与蛋白合成抑制剂对甜菜GS 基因表达的影响 | 第55-61页 |
| ·经氮素诱导后放线菌素D 处理甜菜叶片GS 活性的变化 | 第55-56页 |
| ·经氮素诱导后放线菌酮处理甜菜叶片GS 活性的变化 | 第56-57页 |
| ·经氮素诱导后放线菌素D 处理甜菜叶片GS1m RNA 的变化 | 第57-58页 |
| ·经氮素诱导后放线菌素D 处理甜菜叶片GS2m RNA 的变化 | 第58页 |
| ·经氮素诱导后放线菌酮处理甜菜叶片G51mRNA 的变化 | 第58-59页 |
| ·经氮素诱导后放线菌酮处理甜菜叶片G52mRNA 的变化 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| ·甜菜GS 基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·甜菜的诱导处理及RNA 的提取 | 第61页 |
| ·甜菜GS 基因及克隆方法 | 第61-62页 |
| ·甜菜GS 的生物信息学分析 | 第62-63页 |
| ·甜菜谷氨酰胺合成酶基因的表达分析 | 第63-66页 |
| ·氮素对甜菜GS 基因表达的影响 | 第63-64页 |
| ·氮素诱导后核酸与蛋白合成抑制剂对甜菜GS 基因表达的影响 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
