| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-43页 |
| 1 植物反应器生产药用蛋白的研究进展 | 第17-25页 |
| ·转基因植物生产药用蛋白的优点 | 第17-18页 |
| ·转基因植物生产药用蛋白的基本方法 | 第18-20页 |
| ·稳定表达系统 | 第18-19页 |
| ·暂态表达系统 | 第19-20页 |
| ·植物表达系统的选择 | 第20-21页 |
| ·转基因植物生产药用蛋白的研究进展 | 第21-24页 |
| ·利用转基因植物生产抗体 | 第21-23页 |
| ·利用转基因植物生产疫苗 | 第23页 |
| ·利用转基因植物生产其它药物蛋白 | 第23-24页 |
| ·利用转基因植物生产医药蛋白研究中存在的问题和解决方法 | 第24-25页 |
| ·外源蛋白表达量问题 | 第24页 |
| ·外源蛋白的下游加工问题 | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25页 |
| 2 植物基因工程疫苗的研究进展 | 第25-34页 |
| ·转基因植物疫苗免疫特点研究 | 第26-28页 |
| ·植物口服疫苗的发展现状 | 第28-34页 |
| ·病毒性抗原 | 第28-32页 |
| ·细菌性抗原 | 第32-34页 |
| 3 乙型肝炎病毒疫苗的研究进展 | 第34-38页 |
| ·HBV 的分子生物学 | 第34-37页 |
| ·HBV 疫苗的研究进展 | 第37-38页 |
| 4 番茄果实特异性启动子的研究进展 | 第38-41页 |
| ·番茄E8 基因启动子 | 第39-40页 |
| ·番茄2A11 基因启动子 | 第40-41页 |
| 5 本研究的目的、意义和研究内容 | 第41-43页 |
| ·目的意义 | 第41-42页 |
| ·研究内容 | 第42-43页 |
| 第二章 番茄果实特异性启动子的克隆及功能鉴定 | 第43-57页 |
| 1 材料 | 第43-46页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌体和质粒 | 第43页 |
| ·仪器设备 | 第43-44页 |
| ·工具酶 | 第44页 |
| ·主要的化学试剂、试剂盒 | 第44页 |
| ·常用溶液及培养基配制 | 第44-46页 |
| 2 方法 | 第46-53页 |
| ·番茄果实特异性启动子2A11 基因的克隆 | 第46-51页 |
| ·番茄总DNA 的提取 | 第46页 |
| ·引物的设计与合成 | 第46-47页 |
| ·巢式PCR 扩增 | 第47-48页 |
| ·回收目的片段 | 第48页 |
| ·目的片段的克隆 | 第48-49页 |
| ·感受态E.coli DH5α的制备 | 第49页 |
| ·连接物转化大肠杆菌E.coli DH5α | 第49页 |
| ·碱裂解法小量快速质粒提取 | 第49-50页 |
| ·酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·2A11 启动子的功能鉴定 | 第51-53页 |
| ·瞬时植物表达载体的构建 | 第51页 |
| ·PCR 鉴定法鉴定pCAMBIA2A11 质粒 | 第51页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·用低温冷冻法直接转化农杆菌 | 第52页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第52页 |
| ·根癌农杆菌介导的GUS 瞬时表达 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·樱桃番茄基因组 DNA 的提取 | 第53页 |
| ·PCR 结果 | 第53-54页 |
| ·2A11- pMD18-T 重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·测序及序列分析结果 | 第54页 |
| ·GenBank 登陆 | 第54页 |
| ·启动子驱动GUS 基因在番茄果实组织中的瞬时表达 | 第54-57页 |
| 第三章 乙型肝炎表面抗原基因植物表达载体的构建 | 第57-65页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·菌种与质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| ·植物双元表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·质粒的小量提取（碱裂解法） | 第58页 |
| ·限制性内切酶的反应体系 | 第58页 |
| ·回收目的片段 | 第58页 |
| ·连接反应 | 第58-59页 |
| ·植物双元载体的构建 | 第59页 |
| ·感受态E.coli DH5α的制备 | 第59页 |
| ·连接物转化大肠杆菌E.coli DH5α | 第59页 |
| ·植物双元表达载体的酶切鉴定 | 第59-60页 |
| ·植物表达载体中番茄特异启动子和目的基因HBsAg 的测序鉴定 | 第60页 |
| ·双元质粒载体转化农杆菌 | 第60-61页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第60页 |
| ·用低温冷冻法直接转化农杆菌 | 第60页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-65页 |
| ·双元质粒载体的构建与鉴定 | 第61页 |
| ·双元载体系统微型Ti 质粒转化农杆菌及转化子的鉴定 | 第61-65页 |
| 第四章 农杆菌介导番茄的遗传转化 | 第65-89页 |
| 1 材料 | 第65-67页 |
| ·植物材料 | 第65页 |
| ·菌体 | 第65页 |
| ·仪器设备 | 第65页 |
| ·主要的化学试剂、试剂盒 | 第65-66页 |
| ·常用溶液及培养基配制 | 第66-67页 |
| ·番茄培养基类型 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-72页 |
| ·番茄离体培养再生方法 | 第67页 |
| ·番茄遗传转化体系的建立和优化 | 第67-69页 |
| ·不同培养基对愈伤组织和不定芽形成的影响 | 第67-68页 |
| ·番茄对抗生素的敏感性试验 | 第68页 |
| ·农杆菌介导番茄转化基本流程及抗性苗筛选 | 第68-69页 |
| ·转化体鉴定 | 第69-72页 |
| ·GUS 基因瞬时表达检测 | 第69页 |
| ·GUS 基因的稳定表达检测 | 第69页 |
| ·聚合酶链式反应扩增（PCR）法检测外源基因的整合 | 第69-70页 |
| ·Southern 杂交检测目的基因的整合 | 第70-72页 |
| ·植物蛋白抗原活性的 ELISA ( 双抗体夹心法) 检测 | 第72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-88页 |
| ·番茄遗传转化体系的建立和优化 | 第72-80页 |
| ·外植体组培形态变化 | 第73页 |
| ·不同培养基对愈伤组织和不定芽形成的影响 | 第73-74页 |
| ·番茄外植体对抗生素的敏感性试验 | 第74-75页 |
| ·番茄转化方法的优化 | 第75-79页 |
| ·优化后的转化流程 | 第79-80页 |
| ·抗性苗的获得 | 第80页 |
| ·外源基因整合、表达的检测 | 第80-88页 |
| ·报告基因（GUS）检测结果 | 第80页 |
| ·目的基因PCR 检测 | 第80-82页 |
| ·Southern 杂交 | 第82-85页 |
| ·转基因植株中目的基因表达活性及表达量的检测 | 第85-88页 |
| 4 转基因植物的扩繁与移栽 | 第88-89页 |
| 第五章 讨论 | 第89-95页 |
| 1 植物表达载体的构建 | 第89页 |
| 2 植物基因转化及外源基因在植物中的表达情况 | 第89-91页 |
| ·影响转化因素的改进 | 第89-90页 |
| ·嵌和体现象 | 第90页 |
| ·假转化体的产生 | 第90-91页 |
| ·试管苗的玻璃化现象 | 第91页 |
| 3 转基因植物疫苗研究中普遍存在的问题和解决方法 | 第91-94页 |
| ·存在问题 | 第91-92页 |
| ·解决对策 | 第92-94页 |
| 4 番茄作为乙型肝炎植物口服疫苗的前景 | 第94-95页 |
| 第六章 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 缩略词 | 第103-104页 |
| 附录1 | 第104-105页 |
| 附录2 | 第105-108页 |
| 附录3 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
