干旱胁迫下黄檗消减文库的构建及Ⅱ型MT基因的克隆
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-24页 |
| ·黄檗的研究现状 | 第9-10页 |
| ·植物抗旱基因工程研究进展 | 第10-17页 |
| ·植物应对干旱的生物学反应 | 第10-13页 |
| ·干旱胁迫下植物的代谢调节网络 | 第13-17页 |
| ·抑制性消减杂交技术(SSH)简介 | 第17-19页 |
| ·抑制性消减杂交的原理与实验过程 | 第17-18页 |
| ·SSH技术的优点和主要缺陷 | 第18-19页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术简介(RACE) | 第19-22页 |
| ·RLM-RACE的基本原理 | 第19-20页 |
| ·RACE技术的优点和缺点 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增过程的优化 | 第21-22页 |
| ·论文主要内容和研究意义 | 第22-24页 |
| ·主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| 2 黄檗cDNA消减文库的构建 | 第24-40页 |
| ·实验材料和试剂 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要引物序列 | 第24页 |
| ·实验过程 | 第24-34页 |
| ·水势的测定 | 第25页 |
| ·黄檗总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·黄檗mRNA的分离 | 第26页 |
| ·抑制性消减文库的构建 | 第26-31页 |
| ·文库的转化和阳性克隆鉴定 | 第31-33页 |
| ·文库的测序和EST生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·EST序列提交Genbank | 第34页 |
| ·实验结果与分析 | 第34-38页 |
| ·叶片水势的测定结果 | 第34页 |
| ·黄檗总RNA和mRNA的提取 | 第34-35页 |
| ·双链cDNA的合成与Rsa I酶切效率分析 | 第35页 |
| ·消减杂交后两轮PCR扩增产物结果分析 | 第35-36页 |
| ·文库的质量分析 | 第36页 |
| ·EST序列的同源性分析 | 第36-38页 |
| ·序列提交Genbank | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 3 RACE技术克隆金属硫蛋白基因全长序列 | 第40-54页 |
| ·实验材料与试剂 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·引物序列 | 第40页 |
| ·实验过程 | 第40-47页 |
| ·MT基因特异性引物设计 | 第40页 |
| ·黄檗总RNA提取及mRNA纯化 | 第40-41页 |
| ·mRNA脱磷酸化 | 第41-42页 |
| ·mRNA帽子结构的去除 | 第42-43页 |
| ·mRNA与RNA Oligo的连接 | 第43-44页 |
| ·mRNA的反转录 | 第44页 |
| ·MT 5’末端PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·5’ RACE产物的克隆、筛选和测序 | 第45-46页 |
| ·MT cDNA序列克隆 | 第46-47页 |
| ·MT序列的生物信息学分析 | 第47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-53页 |
| ·MT基因特异性引物设计 | 第47页 |
| ·总RNA提取和mRNA纯化 | 第47-48页 |
| ·5’RACE的扩增 | 第48页 |
| ·5’RACE产物的克隆、筛选 | 第48-49页 |
| ·cDNA序列的克隆 | 第49页 |
| ·全长序列的拼接、ORF分析 | 第49-50页 |
| ·BLAST分析 | 第50-52页 |
| ·氨基酸序列同源性比对分析 | 第52页 |
| ·进化树分析 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 结论 | 第54页 |
| 讨论与展望 | 第54-55页 |
| 下一步研究方向 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
