| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 英文缩写 | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-21页 |
| 1 基因沉默的发现 | 第11-12页 |
| 2 基因沉默的概念及种类 | 第12-13页 |
| 3 转录后基因沉默的分子机制 | 第13-15页 |
| 4 与转录后基因沉默相关的基因 | 第15-16页 |
| 5 转录后基因沉默的特点 | 第16页 |
| 6 转录后基因沉默抑制子 | 第16-19页 |
| ·烟草蚀刻病毒蛋白HC-Pro | 第16-18页 |
| ·马铃薯X 病毒蛋白P25 | 第18-19页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一章 基于双元载体的瞬时沉默体系的建立及基因沉默抑制子Pl/HC-Pro在该体系中的作用 | 第21-44页 |
| 1 材料与方法 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·方法 | 第23-32页 |
| ·pCAMBIA1301 系列质粒的构建及鉴定 | 第23-28页 |
| ·农杆菌侵染烟草 | 第28页 |
| ·植株表型的观察 | 第28页 |
| ·GFP和P1/HC-Pro 基因RNA 水平分析 | 第28-31页 |
| ·GFP 蛋白水平分析 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-41页 |
| ·pCAMBIA1301 系列重组质粒的鉴定 | 第32-34页 |
| ·植株表型分析结果 | 第34-35页 |
| ·GFP 和P1/HC-Pro 基因半定量RT-PCR 分析结果 | 第35-39页 |
| ·GFP 和P1/HC-Pro 基因Northern 分析结果 | 第39-40页 |
| ·GFP 蛋白Western 分析结果 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| ·基于双元载体的瞬时沉默体系的建立 | 第41-42页 |
| ·P1/HC-Pro 在瞬时体系中提高了GFP 的表达量 | 第42-44页 |
| 第二章 农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系的建立及基因沉默抑制子P25 在该体系中的作用 | 第44-68页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·Rubisco 大小亚基的分离 | 第46页 |
| ·透析袋的处理 | 第46页 |
| ·电洗脱纯化Rubisco 大小亚基 | 第46页 |
| ·BALB/c 小鼠的免疫 | 第46-47页 |
| ·小鼠Rubisco 大小亚基多抗的收集和保存 | 第47页 |
| ·间接ELISA 法测定鼠尾血抗体效价 | 第47页 |
| ·小鼠多抗的Westernblot 杂交 | 第47页 |
| ·农杆菌侵染烟草 | 第47-48页 |
| ·植株表型的观察 | 第48页 |
| ·GFP 和P25 基因RNA水平分析 | 第48页 |
| ·GFP 蛋白Western 杂交 | 第48页 |
| ·GFP 转基因位点甲基化分析 | 第48-51页 |
| ·p25-GFP 重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·基因枪法转化p25-GFP 质粒 | 第52页 |
| ·共聚焦激光扫描显微镜观察 P25 亚细胞定位 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-64页 |
| ·Rubisco 大小亚基抗体的制备 | 第52-54页 |
| ·Rubisco 大小亚基的分离与纯化 | 第52-53页 |
| ·免疫印迹法检测Rubisco 大、小亚基多克隆抗体 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系的建立及优化 | 第54-57页 |
| ·Rubisco 小亚基沉默植株表型 | 第54页 |
| ·烟草rbcS 基因沉默后的免疫印迹检测 | 第54-55页 |
| ·GFP 基因沉默植株表型 | 第55-56页 |
| ·农杆菌浓度对GFP 基因沉默效率的影响 | 第56-57页 |
| ·苗龄对GFP 基因沉默效率的影响 | 第57页 |
| ·P25 对GFP 转基因位点的甲基化的影响 | 第57-62页 |
| ·P25 对GFP 基因沉默影响的植株表型分析结果 | 第57-58页 |
| ·GFP 基因Northern 分析结果 | 第58页 |
| ·GFP 蛋白Western 分析结果 | 第58-59页 |
| ·P25 基因RT-PCR 分析结果 | 第59页 |
| ·GFP 转基因位点甲基化分析结果 | 第59-62页 |
| ·基因沉默抑制子P25 的亚细胞定位 | 第62-64页 |
| ·p25-GFP 重组质粒的鉴定 | 第62-63页 |
| ·共聚焦激光扫描显微镜观察亚细胞定位结果 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-68页 |
| ·Rubisco 大小亚基多克隆抗体的制备与应用 | 第64-65页 |
| ·农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系的建立 | 第65-66页 |
| ·P25 不能影响GFP 转基因位点的甲基化 | 第66-67页 |
| ·P25 定位于洋葱表皮细胞的细胞核和细胞质 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第79-80页 |
