| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 专业名词缩写中英文对照表 | 第14-15页 |
| 技术路线 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一部分 人胚胎成纤维细胞的采集及其基本检测 | 第18-30页 |
| 1.材料与方法 | 第18-22页 |
| ·材料和试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| 2 结果 | 第22-23页 |
| ·从自愿放弃妊娠的人工流产胚胎分离hEFs的结果 | 第22页 |
| ·hEFs的支原体、衣原体以及普通细菌培养结果以及hoechst33258染色结果 | 第22页 |
| ·在hEFs饲养层上生长的hESCs的特征鉴定 | 第22页 |
| ·hEFs细胞群的胚层检测 | 第22-23页 |
| ·hEFs的核型检查结果如下 | 第23页 |
| 3 讨论 | 第23-24页 |
| ·从自愿放弃妊娠的人工流产胚胎分离hEFs的效率 | 第23页 |
| ·收集到的9株hEFs没有支原体,衣原体以及细菌感染 | 第23-24页 |
| ·收集到的9株hEFs制成的饲养层均能支持hESC克隆生长 | 第24页 |
| ·hEFs细胞群组成在培养过程中存在变化 | 第24页 |
| ·hEFs"性别"的作用 | 第24页 |
| 4.图片与说明 | 第24-30页 |
| ·各标本来源成纤维细胞的hoechst33258染色 | 第24-25页 |
| ·chHES20克隆和chHES22克隆在各标本来源的饲养层上的生长情况(光镜) | 第25-26页 |
| ·chHES20克隆和chHES22克隆在各标本来源的饲养层上的生长情况(AKP染色) | 第26-27页 |
| ·chHES20克隆和chHES22克隆在各标本来源的饲养层上的生长情况(tra-1-60染色) | 第27-28页 |
| ·hEF-dly-8、hEF-dly-9的p0、p1及p7三胚层标记物+nestin阳性细胞检测 | 第28-30页 |
| 第二部分 添加各种不同物质的培养体系对成纤维细胞增殖的影响 | 第30-34页 |
| 1.材料 | 第30-31页 |
| ·细胞材料和试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第31页 |
| 2.方法 | 第31-32页 |
| ·hEFs培养基的配制 | 第31页 |
| ·hEFs的扩增传代 | 第31-32页 |
| ·hEFs的计数 | 第32页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-33页 |
| 4.讨论 | 第33-34页 |
| 第三部分 成纤维细胞在体外培养的生长曲线中各期(滞后期,对数生长期,平台期,衰退期)制备饲养层的效果 | 第34-40页 |
| 1.材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料和试剂 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| 2 结果 | 第38-39页 |
| ·hEFs的11天生长曲线 | 第38页 |
| ·不同生长曲线时期的hEFs制作成的饲养层上生长的hESCs克隆分化率的比较 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-40页 |
| 第四部分 不同密度的饲养层对HESCS的影响 | 第40-46页 |
| 1.材料与方法 | 第40-43页 |
| ·材料和试剂 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| 2 结果 | 第43-45页 |
| ·chHES 22p66克隆在1×、3×、6×密度饲养层上的分化率的比较 | 第43-44页 |
| ·chHES 20p66克隆在1×、3×、6×密度饲养层上的分化率的比较 | 第44页 |
| ·chHES 22p74克隆在2×、3×、4×密度饲养层上的分化率 | 第44-45页 |
| ·chHES 20p74克隆在2×、3×、4×密度饲养层上的分化率 | 第45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第五部分 不同胚胎标本来源的饲养层对HESCS的影响 | 第46-52页 |
| 1.材料与方法 | 第46-50页 |
| ·材料和试剂 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| 2.结果 | 第50-51页 |
| ·在不同胚胎标本来源的hEFs饲养层上生长的hESCs克隆分化率比较 | 第50页 |
| ·在不同胚胎标本来源的hEFs饲养层上生长的hESCs的多能性基因的RT-PCR | 第50-51页 |
| 3.讨论 | 第51-52页 |
| 总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 综述 | 第55-61页 |
| 附录:人源性饲养层制作的标准化操作手册 | 第61-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
