鸡胚原始生殖细胞体外转染及其介导的转基因研究
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 转基因鸡的研究现状和进展 | 第12-13页 |
| 2 干细胞介导生产转基因动物研究进展 | 第13-16页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第13-14页 |
| ·干细胞核移植法 | 第14页 |
| ·精原干细胞介导法 | 第14-15页 |
| ·原始生殖细胞介导法 | 第15-16页 |
| 3 鸡 PGCs 的起源及迁移 | 第16-17页 |
| 4 鸡 PGCs 的形态特征 | 第17页 |
| 5 鸡 PGCs 的分离提纯 | 第17-18页 |
| 6 鸡 PGCs 细胞的鉴定 | 第18-20页 |
| ·形态学鉴定 | 第18页 |
| ·PAS 特异性染色检测 | 第18页 |
| ·碱性磷酸酶活性（AKP）检测 | 第18页 |
| ·核型分析 | 第18页 |
| ·体内分化实验 | 第18-19页 |
| ·体外分化实验 | 第19页 |
| ·嵌合体实验 | 第19页 |
| ·胚胎阶段特异性胚胎表面抗原 | 第19页 |
| ·荧光免疫检验和外源凝集素双重染色法 | 第19-20页 |
| ·端粒酶活性 | 第20页 |
| ·Oct-4 | 第20页 |
| 7 基因转染技术 | 第20-22页 |
| ·磷酸钙介导DNA 稳定转染 | 第21页 |
| ·脂质体介导的瞬时转染 | 第21页 |
| ·电穿孔法稳定转染 | 第21-22页 |
| 8 禽类嵌合体的研究进展 | 第22页 |
| 9 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验部分 | 第24-48页 |
| 实验一 鸡胚原始生殖细胞的体外转染及筛选 | 第24-40页 |
| 1 材料和方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·饲养层的制备 | 第24-25页 |
| ·鸡EPGCs 的分离 | 第25页 |
| ·鸡 EPGCs 的培养和传代 | 第25-26页 |
| ·鸡EPGCs 的鉴定 | 第26-27页 |
| ·鸡胚胎PGCs 细胞对G418 毒性敏感试验 | 第27页 |
| ·pEGFP-N1 质粒的制备 | 第27-28页 |
| ·三种转染的方法 | 第28-29页 |
| ·转染率的观察与计算 | 第29页 |
| ·转染细胞的筛选 | 第29页 |
| 2 实验结果 | 第29-37页 |
| ·鸡EPGCs 的鉴定 | 第29-30页 |
| ·鸡EPGCs 的特异性PAS 染色 | 第29页 |
| ·EPGCs 的AKP 活性检测 | 第29-30页 |
| ·EPGCs 的SSEA-1 免疫荧光检测 | 第30页 |
| ·Hoechst33342 免疫荧光检测 | 第30页 |
| ·G418 毒性敏感实验结果 | 第30-31页 |
| ·不同转染方法结果比较 | 第31-32页 |
| ·电穿孔转染条件的优化 | 第32-37页 |
| ·不同电场强度对细胞存活率及转染率的影响 | 第32-33页 |
| ·不同时间常数对存活率及转染率的影响 | 第33-34页 |
| ·不同质粒浓度对存活率及转染率的影响 | 第34-35页 |
| ·转染后放置在不同温度中对存活率及转染率的影响 | 第35-37页 |
| ·鸡 EPGCs 的筛选 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| ·体外转染鸡EPGCs 的适宜方法 | 第37-38页 |
| ·电穿孔转染条件的优化 | 第38页 |
| ·鸡EPGCs 的筛选 | 第38-40页 |
| 实验二 EPGCs介导的转基因鸡研究 | 第40-48页 |
| 1 材料和方法 | 第40-43页 |
| ·受精蛋 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·转基因细胞的获得 | 第40-41页 |
| ·蛋壳膜的制备 | 第41页 |
| ·预处理 | 第41页 |
| ·去壳 | 第41页 |
| ·封口 | 第41页 |
| ·孵化条件 | 第41页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·PCR 检测 | 第42页 |
| ·冰冻切片 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-45页 |
| ·鸡胚孵化结果 | 第43页 |
| ·PCR 产物琼脂糖检测结果 | 第43-44页 |
| ·外源基因的整合与表达结果 | 第44页 |
| ·冰冻切片结果 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| ·EPGCs 介导生产转基因鸡 | 第45-46页 |
| ·影响鸡胚孵化率的因素 | 第46页 |
| ·影响鸡胚阳性率的因素 | 第46-47页 |
| ·冰冻组织切片荧光检测分析 | 第47-48页 |
| 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第59-60页 |
