| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 一、文献综述 | 第8-26页 |
| 1 玉米淀粉生物合成及其关键酶 | 第8-14页 |
| ·淀粉的生物合成 | 第8-9页 |
| ·淀粉合成的关键酶 | 第9-13页 |
| ·腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADPGPPase) | 第9-10页 |
| ·颗粒结合淀粉合成酶(GBSS) | 第10页 |
| ·可溶性淀粉合成酶(SSS) | 第10-12页 |
| ·淀粉分支酶(SBE) | 第12-13页 |
| ·关键酶活性动态变化对淀粉积累的作用 | 第13-14页 |
| 2 植物基因克隆技术及其发展 | 第14-19页 |
| ·常用的目的基因克隆技术 | 第15-16页 |
| ·通过已知基因产物的分析和鉴定 | 第15页 |
| ·通过遗传表型分析 | 第15页 |
| ·以图谱为基础的定位克隆技术 | 第15-16页 |
| ·发展中的基因克隆新技术 | 第16-17页 |
| ·从研究缺陷突变体的表型着手分离基因 | 第16页 |
| ·从大的基因组区域直接分离编码序列 | 第16-17页 |
| ·通过研究MRNA差异表达筛选克隆基因 | 第17-18页 |
| ·表型克隆法 | 第18页 |
| ·应用DNA芯片技术筛选新基因 | 第18-19页 |
| 3 酵母双杂交 | 第19-26页 |
| ·酵母双杂交体系的原理及应用 | 第19-22页 |
| ·酵母双杂交系统优点 | 第22-23页 |
| ·酵母双杂交体系的新发展 | 第23-26页 |
| 二、村料与方法 | 第26-39页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·菌株、载体与抗生素 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·分析软件 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-39页 |
| ·总RNA提取 | 第27-28页 |
| ·MRNA分离纯化 | 第28-29页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库(AD-文库)的构建 | 第29-34页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第29-32页 |
| ·同源转化酵母菌株AH109 | 第32-33页 |
| ·在SD/-Leu培养基上筛选转化菌株 | 第33-34页 |
| ·融合筛选AD文库 | 第34-39页 |
| ·诱饵蛋白载体构建 | 第34-39页 |
| 三、结果与分析 | 第39-47页 |
| 1 玉米胚乳总RNA和MRNA的质量 | 第39-40页 |
| 2 双链CDNA文库的琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 3 文库容量分析及其鉴定 | 第41页 |
| 4 玉米SS1基因的克隆 | 第41-47页 |
| ·玉米胚乳RNA的提取 | 第41页 |
| ·RT-PCR扩增目的片段 | 第41-42页 |
| ·连接产物阳性克隆的PCR分析 | 第42-43页 |
| ·测序分析 | 第43-44页 |
| ·构建诱饵蛋白载体 | 第44-47页 |
| 四、讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第57页 |