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稻瘟菌激活蛋白基因克隆及功能解析

第一章 引言第1-32页
 1 蛋白激发子第14-17页
   ·激发子定义及概要第14-15页
   ·蛋白激发子种类及其在国内外研究进展第15-17页
 2 差异蛋白与差异基因筛选方法第17-31页
   ·差异蛋白常用筛选方法第17-23页
   ·差异基因常用筛选方法第23-31页
 3 研究目的与意义第31-32页
第二章 稻瘟菌激活蛋白的纯化及其理化性质分析第32-42页
 1 材料与方法第32-36页
   ·材料第32-33页
   ·试验方法第33-36页
     ·稻瘟菌生长曲线测定第33-34页
     ·稻瘟菌激活蛋白的提纯第34页
     ·样品的制备及电泳第34页
     ·蛋白质氨基酸序列测定第34-35页
     ·蛋白质等电点的测定第35页
     ·蛋白质糖基化检测第35页
     ·烟草愈伤组织和悬浮细胞的获得第35页
     ·对烟草悬浮细胞过氧化氢含量的影响第35-36页
 2 结果与分析第36-41页
   ·稻瘟菌生长曲线测定第36-37页
   ·烟草愈伤组织和悬浮细胞的获得第37-38页
   ·稻瘟菌植物激活蛋白的分离纯化及检测第38-39页
   ·蛋白氨基酸序列测定第39-40页
   ·蛋白等电点的测定第40页
   ·蛋白糖基化检测第40-41页
 3.小结与讨论第41-42页
第三章 稻瘟菌激活蛋白的生物学活性及功能分析第42-52页
 1.材料与方法第42-45页
   ·材料第42-43页
   ·试验方法第43-45页
     ·稻瘟菌激活蛋白的制备与浓度测定第43页
     ·激活蛋白对番茄和丝瓜发芽的影响第43页
     ·激活蛋白对植株生长的影响第43页
     ·激活蛋白对番茄、水稻抗性的诱导作用第43-44页
     ·激活蛋白对黄瓜、豌豆幼苗及烟草悬浮细胞纤维素酶的影响第44页
     ·激活蛋白对烟草悬浮细胞过氧化氢含量的影响第44-45页
     ·激活蛋白对水稻幼苗脯氨酸含量的影响第45页
     ·激活蛋白对碗豆幼苗醇脱氢酶活性的影响第45页
 2 结果与分析第45-50页
   ·激活蛋白对植物丝瓜、番茄发芽的影响第45-46页
   ·激活蛋白对植物豌豆和水稻幼苗生长的促进作用第46-47页
   ·激活蛋白对水稻抗病性及抗旱性的诱导作用第47-48页
   ·激活蛋白对黄瓜、豌豆幼苗及烟草悬浮细胞纤维素酶的影响第48-49页
   ·激活蛋白对水稻幼苗脯氨酸含量的影响第49-50页
   ·激活蛋白对碗豆幼苗醇脱氢酶活性的影响第50页
   ·激活蛋白对烟草悬浮细胞过氧化氢含量的影响第50页
 3.小结与讨论第50-52页
第四章 稻瘟菌激活蛋白激发水稻基因的差异表达第52-74页
 1.材料与方法第52-62页
   ·材料第52-53页
   ·试验方法第53-62页
     ·水稻样品的处理第53页
     ·蛋白质双向电泳第53-55页
     ·高效液相色谱第55页
     ·水稻总RNA的提取第55-56页
     ·mRNA的纯化第56页
     ·SSH文库的构建第56-61页
     ·Southern Blotting检测第61-62页
     ·阳性克隆测序及结果分析第62页
 2 结果与分析第62-70页
   ·水稻样品的处理第62页
   ·总蛋白分析第62-65页
     ·蛋白质双向电泳第62-63页
     ·溶解蛋白高效液相色谱分析第63-65页
   ·水稻总RNA与mRNA的提取与检测第65页
   ·SSH文库的构建第65-70页
     ·Rsa I 酶切及接头效率的检测第65-66页
     ·差减杂交PCR产物分析第66-67页
     ·插入片段检测第67页
     ·地高辛杂交检测第67-68页
     ·阳性克隆测序及生物信息学分析第68-70页
 3 小结与讨论第70-74页
   ·双向电泳第70-71页
   ·高效液相第71页
   ·SSH文库在水稻基因差异表达研究中的优越性及注意事项第71-72页
   ·激活蛋白诱导的水稻差异表达基因第72-74页
第五章 稻瘟菌激活蛋白基因的克隆与表达第74-114页
 1.材料与方法第74-84页
   ·材料第74-75页
   ·试验方法第75-84页
     ·基因组DNA的提取第75页
     ·稻瘟菌激活蛋白基因组DNA的克隆及鉴定第75-78页
     ·稻瘟菌RNA的提取第78-79页
     ·用磁珠PCR法获得稻瘟菌总cDNA第79-81页
     ·从稻瘟菌总cDNA中扩增目的基因并克隆检测第81页
     ·酵母双杂交自激活检测第81-83页
     ·原核表达第83-84页
 2 结果与分析第84-111页
   ·稻瘟菌激活蛋白基因组DNA的克隆及鉴定第84-96页
   ·稻瘟菌激活蛋白cDNA的克隆及鉴定第96-101页
     ·总RNA的提取第96-97页
     ·用磁珠和PCR方法从少量RNA获得cDNA第97-98页
     ·稻瘟菌激活蛋白基因的克隆及序列分析第98-101页
   ·利用pET22b(+)进行表达载体的构建与表达第101-103页
   ·利用pTWIN1进行表达载体的构建与表达第103-104页
   ·利用pGEX-5X-1进行表达载体的构建与表达第104-106页
   ·对载体pET22b(+)的改造与表达第106-108页
   ·表达蛋白活性测定第108-109页
   ·酵母双杂交自激活检测第109-111页
 3.小结与讨论第111-114页
   ·扩增的基因第111页
   ·cDNA的扩增第111-112页
   ·稻瘟菌激活蛋白表达第112-114页
总结第114-115页
参考文献第115-125页
致谢第125页

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