中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一章 引言 | 第10-16页 |
1 植物油酸的价值 | 第10-11页 |
·油酸的营养价值 | 第10-11页 |
·油酸的经济价值 | 第11页 |
2 油酸的生物合成 | 第11-13页 |
·油酸的生物合成途径 | 第11-12页 |
·油酸生物合成的分子机制 | 第12-13页 |
3 植物油酸改良的基因工程研究 | 第13-15页 |
·反义RNA技术与植物脂肪酸改良 | 第13-14页 |
·RNAi干扰技术与植物脂肪酸改良 | 第14-15页 |
4 研究的目的意义和主要内容 | 第15-16页 |
第二章 几种种子特异性表达启动子的克隆和测序 | 第16-33页 |
1 实验材料 | 第17页 |
·植物材料 | 第17页 |
·菌种和质粒 | 第17页 |
·酶和生化试剂 | 第17页 |
·所用引物 | 第17页 |
2 实验方法 | 第17-23页 |
·植物材料的培养 | 第17-18页 |
·植物基因组DNA的提取 | 第18页 |
·核酸质量检测 | 第18页 |
·PCR反应 | 第18-20页 |
·PCR产物的回收 | 第20-21页 |
·PCR扩增产物的克隆 | 第21-22页 |
·阳性克隆的鉴定 | 第22-23页 |
·测序 | 第23页 |
3 实验结果 | 第23-31页 |
·植物基因组总DNA的制备 | 第23-24页 |
·种子特异性表达启动子的分离及克隆 | 第24-28页 |
·种子特异性表达启动子的核苷酸序列分析 | 第28-31页 |
4 讨论 | 第31-33页 |
第三章 花生△12脂肪酸脱氢酶基因FAD2的克隆及反义表达载体的构建和转化 | 第33-55页 |
1 实验材料 | 第34页 |
·植物材料 | 第34页 |
·菌种与质粒 | 第34页 |
·酶和生化试剂 | 第34页 |
·所用引物 | 第34页 |
2 实验方法 | 第34-44页 |
·植物材料的培养 | 第34页 |
·植物基因组DNA的提取 | 第34页 |
·核酸质量检测 | 第34页 |
·PCR反应 | 第34-35页 |
·PCR产物的回收 | 第35页 |
·植物表达载体的构建 | 第35-42页 |
·CaCl_2法制备感受态细胞及转化和提取质粒 | 第42页 |
·测序及序列分析 | 第42页 |
·液氮冻融法制备农杆菌感受态细胞及转化和提取质粒 | 第42-43页 |
·农杆菌侵染花生 | 第43-44页 |
3 实验结果 | 第44-52页 |
·花生脂肪酸脱氢酶基因FAD2目的片段的克隆及分离 | 第44-45页 |
·植物表达载体的构建与转化 | 第45-49页 |
·植物表达载体转化农杆菌 | 第49-50页 |
·花生油酸脱氢酶基因核酸序列分析 | 第50-52页 |
4 讨论 | 第52-55页 |
·FAD2基因片段的克隆与序列分析 | 第52页 |
·脂肪酸调控基因工程中的启动子 | 第52-53页 |
·反义RNA策略在植物基因工程中的应用 | 第53-55页 |
第四章 花生△12脂肪酸脱氢酶基因ihpRNA中间表达载体的构建 | 第55-68页 |
1 实验材料 | 第56页 |
·植物材料 | 第56页 |
·菌种和质粒 | 第56页 |
·酶和生化试剂 | 第56页 |
·引物 | 第56页 |
2 实验方法 | 第56-60页 |
·植物材料的培养 | 第56页 |
·花生基因组DNA的制备 | 第56页 |
·PCR反应 | 第56-57页 |
·ihpRNA中间表达载体的构建 | 第57-60页 |
·测序 | 第60页 |
3 实验结果 | 第60-65页 |
·目的片段的获得 | 第60页 |
·植物表达载体的构建及转化 | 第60-62页 |
·目的片段的核苷酸序列分析 | 第62-65页 |
4 讨论 | 第65-68页 |
·转录后基因沉默 | 第65-66页 |
·RNAi表达载体的构建 | 第66页 |
·RNAi技术在植物基因工程中的应用 | 第66-67页 |
·后续工作 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-76页 |
附录一 | 第76-77页 |
附录二 | 第77-78页 |
附录三 | 第78-82页 |
致谢 | 第82页 |