| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 文献综述 | 第18-66页 |
| 第一章 农药污染与生物修复 | 第18-34页 |
| 1.农药的污染 | 第18-24页 |
| ·农药对水环境的污染 | 第19页 |
| ·农药对土壤生态系统的污染 | 第19-20页 |
| ·农药对大气的污染 | 第20-21页 |
| ·农药对生物的影响 | 第21-24页 |
| 2.生物修复 | 第24-34页 |
| ·生物修复的概念 | 第24-25页 |
| ·生物修复的主力军—微生物 | 第25-26页 |
| ·微生物降解的机制 | 第26页 |
| ·参与微生物降解作用的生物化学过程 | 第26-27页 |
| ·影响微生物降解的因素 | 第27-34页 |
| 第二章 六六六生物降解研究进展 | 第34-50页 |
| 1.概述 | 第34-37页 |
| ·理化性质 | 第34-35页 |
| ·六六六的生物毒性 | 第35页 |
| ·六六六在环境中的残留状态 | 第35-37页 |
| 2.六六六的微生物降解 | 第37-50页 |
| ·微生物对六六六降解的研究状况 | 第37-38页 |
| ·微生物降解γ-HCH的途径 | 第38页 |
| ·γ-HCH降解的相关基因研究 | 第38-50页 |
| 第三章 研究中所涉及的主要研究方法概述 | 第50-66页 |
| 1.降解菌株基因克隆方法概述 | 第50-57页 |
| ·根据已知序列克隆基因 | 第50-51页 |
| ·新基因的克隆方法 | 第51-57页 |
| 2.降解菌株代谢组学研究方法概述 | 第57-66页 |
| ·代谢物组学研究的方法 | 第58-66页 |
| 实验部分 | 第66-146页 |
| 第一章 a-HCH与γ-HCH降解基因的克隆 | 第66-94页 |
| 1.材料与方法 | 第67-73页 |
| ·培养基与试剂 | 第67页 |
| ·菌株与质粒 | 第67-68页 |
| ·培养条件 | 第68页 |
| ·引物的合成 | 第68-69页 |
| ·大肠杆菌高效感受态细胞的制备及转化 | 第69-70页 |
| ·Sphingobium sp.BHC-A基因组DNA的提取 | 第70页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第70-71页 |
| ·PCR扩增反应体系的建立 | 第71页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第71-72页 |
| ·PCR产物的T/A克隆 | 第72-73页 |
| ·基因序列的测序 | 第73页 |
| ·基因序列登录号 | 第73页 |
| 2.结果与分析 | 第73-91页 |
| ·Sphingobium sp.BHC-A基因组DNA的提取 | 第73-74页 |
| ·Sphingobium sp.BHC-A菌株降解γ-HCH的相关lin基因的克隆 | 第74-91页 |
| 3.小结 | 第91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 第二章 β-HCH降解基因的克隆与表达 | 第94-114页 |
| 1.材料与方法 | 第94-103页 |
| ·培养基与试剂 | 第94-95页 |
| ·菌株与质粒 | 第95页 |
| ·转座子的导入 | 第95-96页 |
| ·β-HCH含量的检测 | 第96页 |
| ·营养缺陷型菌株的筛选 | 第96页 |
| ·菌体基因组DNA的提取 | 第96页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第96页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第96-97页 |
| ·DNA酶切反应体系的建立 | 第97页 |
| ·脱磷酸化载体pUC18的制备 | 第97-98页 |
| ·高效感受态细胞的制备和转化 | 第98页 |
| ·PCR法验证突变子基因组中的转座子片段 | 第98-99页 |
| ·突变子中转座子侧翼序列的克隆 | 第99-100页 |
| ·片段序列的测定与序列分析 | 第100页 |
| ·功能互补试验 | 第100-101页 |
| ·β-HCH降解基因的PCR扩增及高效表达载体的构建 | 第101-102页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第102页 |
| ·β-HCH降解基因(linB2)的基因序列登录号 | 第102-103页 |
| 2.结果与分析 | 第103-112页 |
| ·突变子的筛选 | 第103-104页 |
| ·突变子中插入片段的验证 | 第104-105页 |
| ·突变子BHC-A45的基因组DNA的完全酶切 | 第105页 |
| ·基因组文库的构建 | 第105-106页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第106-107页 |
| ·对pBHCl中的质粒进行亚克隆并对转座子侧翼序列进行拼接 | 第107-108页 |
| ·基因水平上的比较分析 | 第108页 |
| ·功能互补实验 | 第108-110页 |
| ·证明linB2基因就是β-HCH降解基因 | 第110-112页 |
| ·linB2基因在E.coli BL21中表达的SDS-PAGE分析 | 第112页 |
| 3.小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-114页 |
| 第三章 LinB2转化β-HCH的产物的鉴定 | 第114-124页 |
| 1.材料与方法 | 第114-115页 |
| ·培养基与试剂 | 第114页 |
| ·菌株 | 第114页 |
| ·粗酶液的制备 | 第114-115页 |
| ·粗酶反应条件与提取 | 第115页 |
| ·气质联机实验 | 第115页 |
| ·核磁共振实验 | 第115页 |
| 2.结果与分析 | 第115-121页 |
| ·鉴定β-五氯环己醇(β-PCHL) | 第115-118页 |
| ·鉴定β-2,3,5,6-四氯-1,4-环己二醇(β-TDOL) | 第118-120页 |
| ·鉴定β-TDOL为降解终产物 | 第120-121页 |
| 3.小结 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-124页 |
| 第四章 鉴定LinA与LinB2在δ-HCH降解过程中的作用 | 第124-146页 |
| 1.材料与方法 | 第124-127页 |
| ·培养基与试剂 | 第124页 |
| ·菌株 | 第124页 |
| ·构建表达载体 | 第124-125页 |
| ·粗酶液的制备 | 第125-126页 |
| ·粗酶反应条件 | 第126页 |
| ·δ-PCCH的制备 | 第126页 |
| ·气相色谱条件 | 第126页 |
| ·气质联机实验 | 第126-127页 |
| ·核磁共振实验 | 第127页 |
| 2.结果与分析 | 第127-142页 |
| ·表达载体的构建 | 第127-128页 |
| ·LinB2对δ-HCH的转化作用与产物鉴定 | 第128-130页 |
| ·LinA对δ-HCH的转化作用与产物鉴定 | 第130-132页 |
| ·d-PCCH的合成 | 第132页 |
| ·LinB2对δ-1,4-TCDN的转化与产物鉴定 | 第132-134页 |
| ·LinB2对δ-PCCH的转化与产物鉴定 | 第134-139页 |
| ·确定LinC2,LinX2和LinD2能否直接降解δ-HCH | 第139-140页 |
| ·确定d-TDOL,d-2,3,5-TCDL与d-DDOL在BHC-A中能否继续被降解 | 第140-142页 |
| 3.小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-146页 |
| 全文总结 | 第146-148页 |
| 博士论文创新点 | 第148-150页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第150-154页 |
| 附录二 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
