| 缩写词 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 1 文献综述 | 第20-36页 |
| 1．1 植物果胶甲酯酶的研究 | 第20-24页 |
| 1．1．1 植物果胶甲酯酶的结构模型 | 第20-21页 |
| 1．1．2 植物果胶甲酯酶的作用方式 | 第21-23页 |
| 1．1．3 花粉特异果胶甲酯酶基因的分离 | 第23-24页 |
| 1．2 植物多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的研究 | 第24-28页 |
| 1．2．1 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的结构与分布 | 第25-26页 |
| 1．2．2 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因 | 第26-27页 |
| 1．2．3 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白与花粉发育 | 第27-28页 |
| 1．3 RNA干涉研究进展 | 第28-36页 |
| 1．3．1 RNA干涉现象的发现及其特点 | 第28-29页 |
| 1．3．2 RNA干涉的作用机理 | 第29-31页 |
| 1．3．2．1 小片段dsRNA与基因沉默 | 第29-30页 |
| 1．3．2．2 RNA干涉所需的基因 | 第30-31页 |
| 1．3．2．3 RNA干涉的可能机制 | 第31页 |
| 1．3．3 RNA干涉技术 | 第31-33页 |
| 1．3．3．1 编码区RNA干涉技术 | 第32页 |
| 1．3．3．2 启动子区KNA干涉技术 | 第32-33页 |
| 1．3．4 RNA干涉的应用 | 第33-36页 |
| 1．3．4．1 功能基因组分析的应用 | 第33-34页 |
| 1．3．4．2 生物遗传改良中的应用 | 第34页 |
| 1．3．4．3 有害基因表达的抑制 | 第34-36页 |
| 2 BcMF3和BcMF4基因表达的Northern杂交分析 | 第36-46页 |
| 2．1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2．1．1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2．1．2 RNA的分离及检测 | 第37-38页 |
| 2．1．3 cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 2．1．3．1 第一链cDNA的合成 | 第38页 |
| 2．1．3．2 cDNA的LD-PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2．1．4 Northern杂交 | 第39-41页 |
| 2．1．4．1 RNA印迹 | 第39-40页 |
| 2．1．4．2 探针的制备 | 第40页 |
| 2．1．4．3 杂交反应及洗膜 | 第40-41页 |
| 2．2 结果与分析 | 第41-43页 |
| 2．2．1 RNA的提取与cDNA的合成 | 第41-42页 |
| 2．2．2 BcMF3基因的表达特征 | 第42-43页 |
| 2．2．3 BcMF4基因的表达特征 | 第43页 |
| 2．3 讨论 | 第43-46页 |
| 3 BcMF3和BcMF4的基因沉默植物表达载体的构建 | 第46-60页 |
| 3．1 材料与方法 | 第46-54页 |
| 3．1．1 总体策略 | 第46-47页 |
| 3．1．2 菌株、质粒和试剂 | 第47页 |
| 3．1．3 目的片断的克隆 | 第47-52页 |
| 3．1．3．1 质粒DNA的提取 | 第47-48页 |
| 3．1．3．2 反义BcMF3基因片段的克隆 | 第48-49页 |
| 3．1．3．3 反义BcMF4基因片段的克隆 | 第49-50页 |
| 3．1．3．4 正义BcMF3基因片段的克隆 | 第50-51页 |
| 3．1．3．5 正义BcMF4基因片段的克隆 | 第51-52页 |
| 3．1．4 CaMV35S启动子的BcMF3和BcMF4基因沉默表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3．1．4．1 反义RNA表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3．1．4．2 双价反义RNA表达载体的构建 | 第53页 |
| 3．1．4．3 RNA干涉表达载体的构建 | 第53页 |
| 3．1．5 A9启动子的BcMF3和BcMF4基因沉默表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3．1．5．1 A9启动子的克隆 | 第53页 |
| 3．1．5．2 A9启动子的表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3．2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 3．2．1 目的片断的获得 | 第54页 |
| 3．2．2 基因沉默的植物表达载体的获得 | 第54-57页 |
| 3．2．2．1 CaMV35S启动子的表达载体的获得 | 第55-56页 |
| 3．2．2．2 A9启动子的表达载体的获得 | 第56-57页 |
| 3．3 讨论 | 第57-60页 |
| 4 BcMF3和BcMF4的基因沉默植物表达载体对拟南芥的转化 | 第60-68页 |
| 4．1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 4．1．1 植物材料、菌株及抗生素 | 第60页 |
| 4．1．2 Floral dip法转化植株 | 第60-61页 |
| 4．1．2．1 拟南芥的培养 | 第60页 |
| 4．1．2．2 农杆菌的培养 | 第60-61页 |
| 4．1．2．3 Floral dip法转化植株 | 第61页 |
| 4．1．3 转化苗的抗生素筛选 | 第61页 |
| 4．1．4 拟南芥基因组DNA的提取 | 第61页 |
| 4．1．5 拟南芥中BcMF3和BcMF4基因同源片断的PCR扩增 | 第61页 |
| 4．1．6 抗性转化植株的分子鉴定 | 第61-63页 |
| 4．1．6．1 抗性转化植株的PCR检测 | 第61-62页 |
| 4．1．6．2 抗性转化植株的Southern杂交检测 | 第62-63页 |
| 4．2 结果与分析 | 第63-65页 |
| 4．2．1 野生型拟南芥中BcMF3和BcMF4基因的同源片断 | 第63页 |
| 4．2．2 抗性转化植株的获得 | 第63-64页 |
| 4．2．3 抗性转化植株的PCR分析 | 第64页 |
| 4．2．4 抗性转化植株的Southern杂交分析 | 第64-65页 |
| 4．3 讨论 | 第65-68页 |
| 5 BcMF3和BcMF4的基因沉默植物表达载体对菜心的转化 | 第68-78页 |
| 5．1 材料与方法 | 第68-70页 |
| 5．1．1 植物材料、菌株及抗生素 | 第68页 |
| 5．1．2 菜心无菌苗的培养 | 第68-69页 |
| 5．1．3 菜心的遗传转化 | 第69-70页 |
| 5．1．3．1 预培养 | 第69页 |
| 5．1．3．2 浸染农杆菌 | 第69页 |
| 5．1．3．3 共培养 | 第69页 |
| 5．1．3．4 分化培养 | 第69页 |
| 5．1．3．5 生根培养 | 第69-70页 |
| 5．1．4 菜心基因组DNA的提取 | 第70页 |
| 5．1．5 菜心中BcMF3和BcMF4基因同源片断的PCR扩增 | 第70页 |
| 5．1．6 抗性转化植株的分子鉴定 | 第70页 |
| 5．1．6．1 抗性转化植株的PCR检测 | 第70页 |
| 5．1．6．2 抗性转化植株的Southern杂交检测 | 第70页 |
| 5．2 结果与分析 | 第70-75页 |
| 5．2．1 菜心中BcMF3和BcMF4基因的同源片断 | 第70-71页 |
| 5．2．2 抗性转化植株的获得 | 第71-72页 |
| 5．2．3 抗性转化植株的PCR分析 | 第72-73页 |
| 5．2．4 抗性转化植株的Southern杂交分析 | 第73-75页 |
| 5．3 讨论 | 第75-78页 |
| 6 BcMF3和BcMF4的基因沉默转基因植株的育性相关性状分析 | 第78-92页 |
| 6．1 材料与方法 | 第78-80页 |
| 6．1．1 植物材料、仪器及试剂 | 第78页 |
| 6．1．2 花器官的形态学观察 | 第78页 |
| 6．1．3 花粉形态的扫描电镜观察 | 第78-79页 |
| 6．1．4 花粉的离体萌发 | 第79页 |
| 6．1．5 花粉活力的检测 | 第79页 |
| 6．1．6 花粉在雌蕊中的生长观察 | 第79页 |
| 6．1．7 果胶甲酯酶活性的测定 | 第79-80页 |
| 6．1．7．1 样品准备 | 第80页 |
| 6．1．7．2 酶浓度测定 | 第80页 |
| 6．1．7．3 酶活性测定 | 第80页 |
| 6．2 结果与分析 | 第80-87页 |
| 6．2．1 转基因植株的花器官形态 | 第80-81页 |
| 6．2．2 转基因植株的花粉形态 | 第81-82页 |
| 6．2．2．1 拟南芥转基因植株的花粉形态 | 第81页 |
| 6．2．2．2 菜心转基因植株的花粉形态 | 第81-82页 |
| 6．2．3 转基因植株花粉的离体萌发 | 第82-84页 |
| 6．2．3．1 拟南芥转基因植株的花粉离体萌发 | 第82-83页 |
| 6．2．3．2 菜心转基因植株的花粉离体萌发 | 第83-84页 |
| 6．2．4 菜心转基因植株的花粉活力 | 第84-85页 |
| 6．2．5 转基因植株花粉管在雌蕊中的生长 | 第85-86页 |
| 6．2．6 不同载体转化菜心的沉默效率 | 第86页 |
| 6．2．7 菜心转基因植株果胶甲酯酶的活性 | 第86-87页 |
| 6．3 讨论 | 第87-92页 |
| 6．3．1 BcMF3和BcMF4基因与雄性不育 | 第87-88页 |
| 6．3．2 启动子类型对沉默BcMF3和BcMF4基因的影响 | 第88页 |
| 6．3．3 载体类型对沉默BcMF3和BcMF4基因的影响 | 第88-89页 |
| 6．3．4 果胶甲酯酶与花粉发育 | 第89-90页 |
| 6．3．5 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白与花粉发育 | 第90-92页 |
| 结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-108页 |
| 博士期间发表的论文 | 第108页 |
