| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| 1．1 丝状真菌启动子结构特点 | 第11-19页 |
| 1．1．1 丝状真菌基因的启动子结构特点 | 第11-12页 |
| 1．1．2 丝状真菌基因的顺式调控研究 | 第12-19页 |
| 1．1．2．1 UAS/URS | 第12页 |
| 1．1．2．2 核心启动子成分 | 第12-13页 |
| 1．1．2．3 tsp的确定 | 第13-14页 |
| 1．1．2．4 其他的顺式作用元件以及相应的反式作用因子 | 第14-17页 |
| 1．1．2．5 CCAAT结合蛋白的组成及演化 | 第17-19页 |
| 1．2 顺式转录调控区的功能分析 | 第19-21页 |
| 1．2．1 突变分析 | 第19-20页 |
| 1．2．2 多拷贝 | 第20-21页 |
| 1．2．3 滴定效应 | 第21页 |
| 1．3 瑞氏木霉纤维素酶及启动子 | 第21-25页 |
| 1．3．1 瑞氏木霉纤维素酶 | 第21-22页 |
| 1．3．2 纤维二糖水解酶Ⅰ(CBHⅠ)启动子 | 第22-24页 |
| 1．3．3 纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)启动子 | 第24-25页 |
| 1．4 本文研究的目的和意义 | 第25-28页 |
| 第二章 瑞氏木霉纤维二糖水解酶基因启动子区葡萄糖阻遏位点缺失以及顺式作用元件区域多拷贝功能分析 | 第28-52页 |
| 2．1 材料和方法 | 第29-38页 |
| 2．1．1 菌株、质粒 | 第29页 |
| 2．1．2 主要试剂 | 第29页 |
| 2．1．3 培养基及培养条件 | 第29-31页 |
| 2．1．3．1 大肠杆菌LB培养基 | 第29页 |
| 2．1．3．2 基本培养基 | 第29页 |
| 2．1．3．3 转化子再生与筛选培养基 | 第29页 |
| 2．1．3．4 土豆培养基 | 第29页 |
| 2．1．3．5 纤维素酶诱导培养基(mg/ml) | 第29-31页 |
| 2．1．4 重组DNA技术 | 第31页 |
| 2．1．4．1 质粒的提取与纯化、琼脂糖凝胶电泳技术、限制性内切酶酶切以及连接反应 | 第31页 |
| 2．1．4．2 质粒一步快速抽提法 | 第31页 |
| 2．1．4．3 一步法制备和转化感受态细菌 | 第31页 |
| 2．1．4．4 普通分子生物学实验方法 | 第31页 |
| 2．1．5 cbh1启动子区域葡萄糖阻遏位点的缺失 | 第31-32页 |
| 2．1．6 缺失载体的构建 | 第32-33页 |
| 2．1．7 顺式作用元件功能区多拷贝质粒的构建 | 第33页 |
| 2．1．8 丝状真菌转化 | 第33-35页 |
| 2．1．8．1 原生质体转化 | 第33-34页 |
| 2．1．8．1．1 瑞氏木霉原生质体的制备 | 第33-34页 |
| 2．1．8．1．2 原生质体的转化 | 第34页 |
| 2．1．8．2 再生和选择 | 第34-35页 |
| 2．1．8．3 转化子的挑选 | 第35页 |
| 2．1．9 瑞氏木霉染色体DNA的提取与纯化 | 第35-36页 |
| 2．1．9．1 瑞氏木霉染色体DNA的大量提取 | 第35页 |
| 2．1．9．2 瑞氏木霉染色体DNA的小量提取 | 第35-36页 |
| 2．1．10 转化子的PCR验证 | 第36页 |
| 2．1．11 RT-PCR分析 | 第36-37页 |
| 2．1．11．1 提取瑞氏木霉 RNA | 第36-37页 |
| 2．1．11．2 RT-PCR | 第37页 |
| 2．1．12 GUS活性的测定 | 第37-38页 |
| 2．1．13 蛋白质含量测定 | 第38页 |
| 2．1．14 转化子GUS比活的确定 | 第38页 |
| 2．2 结果与讨论 | 第38-49页 |
| 2．2．1 重组PCR以及cbh1启动子葡萄糖阻遏位点的缺失 | 第38-40页 |
| 2．2．2 缺失载体的构建 | 第40-43页 |
| 2．2．2．1 pT载体的构建 | 第40-41页 |
| 2．2．2．2 pTG载体的构建 | 第41-43页 |
| 2．2．3 缺失载体的构建 | 第43页 |
| 2．2．4 顺式作用元件功能多拷贝载体的构建 | 第43-44页 |
| 2．2．5 瑞氏木霉转化 | 第44页 |
| 2．2．6 PCR方法挑选瑞氏木霉阳性转化子 | 第44-47页 |
| 2．2．7 RT-PCR验证 | 第47页 |
| 2．2．8 报告基因在cbh1缺失和多拷贝启动子控制下的表达 | 第47-49页 |
| 2．3 讨论 | 第49-50页 |
| 2．4 本章以及全文总结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 在学期间发表的主要文章 | 第57-58页 |
