| 第一章 前言 | 第1-26页 |
| 1．1 蛋白质复性的意义 | 第11页 |
| 1．2 蛋白质复性技术 | 第11-13页 |
| 1．2．1 稀释复性 | 第12页 |
| 1．2．2 辅助因子和添加复性技术 | 第12-13页 |
| 1．2．3 固定化辅助因子复性 | 第13页 |
| 1．3 蛋白质的液相色谱法复性 | 第13-16页 |
| 1．3．1 HIC | 第14-15页 |
| 1．3．2 SEC | 第15页 |
| 1．3．3 IEC | 第15-16页 |
| 1．3．4 AFC | 第16页 |
| 1．4 二硫键的正确对接 | 第16-18页 |
| 1．5 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)概述 | 第18-21页 |
| 1．5．1 hGM-CSF基因的克隆和表达 | 第18-19页 |
| 1．5．2 包涵体的处理 | 第19页 |
| 1．5．3 rhGM-CSF的复性 | 第19-21页 |
| 1．5．4 rhGM-CSF的纯化 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 大肠杆菌生产rhGM-CSF摇瓶发酵工艺和放大工艺研究 | 第26-39页 |
| 2．1 前言 | 第26页 |
| 2．2 实验部分 | 第26-30页 |
| 2．2．1 仪器与试剂 | 第26页 |
| 2．2．2 菌株与主要试剂 | 第26-27页 |
| 2．2．3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2．3 结果分析 | 第30-31页 |
| 2．4 结果与讨论 | 第31-37页 |
| 2．4．1 培养基种类对rhGM-CSF表达的影响 | 第31-32页 |
| 2．4．2 培养温度对E． coli生长的影响 | 第32-33页 |
| 2．4．3 诱导时机对E． coli生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第33-34页 |
| 2．4．4 诱导维持时间对E． coli生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第34页 |
| 2．4．5 接种量对E． coli生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第34-35页 |
| 2．4．6 优化条件下大肠杆菌DH5α/PDH/rh GM-CSF的培养 | 第35-36页 |
| 2．4．7 rhGM-CSF发酵的放大 | 第36-37页 |
| 2．5 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-39页 |
| 第三章 疏水色谱法对rhGM-CSF的复性并同时纯化 | 第39-54页 |
| 3．1 引言 | 第39页 |
| 3．2 理论部分 | 第39-41页 |
| 3．3 实验部分 | 第41-44页 |
| 3．3．1 仪器和设备 | 第41页 |
| 3．3．2 主要试剂 | 第41-44页 |
| 3．4 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 3．4．1 用HPHIC色谱饼复性并同时纯化rhGM-CSF | 第44-45页 |
| 3．4．2 固定相的影响 | 第45页 |
| 3．4．3 盐种类的影响 | 第45-46页 |
| 3．4．4 流动相pH值的影响 | 第46-47页 |
| 3．4．5 流动相中GSH/GSSG的比例对rhGM-CSF复性和纯化的影响 | 第47-48页 |
| 3．4．6 流动相中脲浓度对rhGM-CSF复性和纯化的影响 | 第48-49页 |
| 3．4．7 HPHIC与稀释法的比较 | 第49-50页 |
| 3．4．8 rhGM-CSF的纯度和质量回收率 | 第50-51页 |
| 3．4．9 HPHIC复性过程中rhGM-CSF的质量损失 | 第51页 |
| 3．5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第四章 离子交换色谱法对rhGM-CSF的复性并同时纯化 | 第54-64页 |
| 4．1 引言 | 第54页 |
| 4．2 复性原理 | 第54-55页 |
| 4．3 实验部分 | 第55-56页 |
| 4．3．1 仪器 | 第55页 |
| 4．3．2 试剂 | 第55-56页 |
| 4．3．3 rhGM-CSF包涵体的洗涤、破碎、抽提 | 第56页 |
| 4．3 4 Bradford法测定蛋白含量 | 第56页 |
| 4．3．5 rh GM-CSF活性的测定 | 第56页 |
| 4．3．6 离子交换色谱法对rhGM-CSF粗提物的复性和纯化 | 第56页 |
| 4．3．7 稀释法 | 第56页 |
| 4．4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 4．4．1 HPIEC对rhGM-CSF包涵体提取液的分离纯化 | 第56-57页 |
| 4．4．2 流动相pH值的影响 | 第57-58页 |
| 4．4．3 流动相中GSH/GSSG对rhGM-CSF复性和纯化的影响 | 第58-60页 |
| 4．4．4 流动相中不同脲浓度对rhGM-CSF复性和纯化的影响 | 第60-61页 |
| 4．4．5 HPIEC与稀释法的比较 | 第61-62页 |
| 4．4．6 rh GM-CSF的纯度和质量回收率 | 第62页 |
| 4．5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第五章 排阻色谱法对rhGM-CSF的复性并同时纯化 | 第64-76页 |
| 5．1 前言 | 第64页 |
| 5．2 理论部分 | 第64-67页 |
| 5．2．1 普通排阻色谱复性 | 第64-65页 |
| 5．2．2 脲梯度排阻色谱复性 | 第65-67页 |
| 5．3 实验部分 | 第67-68页 |
| 5．3．1 仪器和材料 | 第67页 |
| 5．3．2 主要试剂 | 第67页 |
| 5．3．3 rhGM-CSF包涵体的洗涤、破碎、抽提 | 第67页 |
| 5．3．4 Bradford法测定蛋白含量 | 第67页 |
| 5．3．5 rhGM-CSF活性的测定 | 第67-68页 |
| 5．3．6 用普通SEC复性rhGM-CSF | 第68页 |
| 5．3．7 用脲梯度SEC复性rhGM-CSF | 第68页 |
| 5．4 结果与讨论 | 第68-73页 |
| 5．4．1 脲浓度对rhGM-CSF复性的影响 | 第68-69页 |
| 5．4．2 流动相pH对rhGM-CSF复性的影响 | 第69-70页 |
| 5．4．3 流动相流速对rhGM-CSF复性影响 | 第70-71页 |
| 5．4．4 GSH/GSSG比例对rhGM-CSF复性的影响 | 第71-72页 |
| 5．4．5 rhGM-CSF纯度和质量回收率 | 第72-73页 |
| 5．4．6 脲梯度SEC复性rhGM-CSF | 第73页 |
| 5．5 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
