| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-29页 |
| 1 CSFV特性 | 第11-12页 |
| 2 CSFV基因组结构 | 第12-17页 |
| ·CSFV核酸非编码区结构与功能 | 第12-13页 |
| ·CSFV ORF及其所编码主要蛋白的结构与功能 | 第13-17页 |
| 3 猪瘟病毒与细胞凋亡 | 第17-20页 |
| 4 流行新特点 | 第20-22页 |
| ·流行范围广 | 第21页 |
| ·散发流行 | 第21页 |
| ·发病年龄小 | 第21页 |
| ·症状以非典型为主 | 第21-22页 |
| 5 猪瘟疫苗研究 | 第22-29页 |
| ·传统疫苗 | 第22-23页 |
| ·新型疫苗 | 第23-27页 |
| ·CSFV基因缺失型弱毒疫苗 | 第23页 |
| ·CSFV亚单位疫苗 | 第23-24页 |
| ·CSFV活载体重组疫苗 | 第24-25页 |
| ·CSFV DNA疫苗 | 第25-26页 |
| ·CSFV全长感染性cDNA标记疫苗 | 第26-27页 |
| ·CSFV疫苗研制及应用中的问题 | 第27-29页 |
| 研究一: 猪瘟病毒广西梧州株、石门株E2基因杆状病毒转移载体的构建 | 第29-49页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR扩增E2基因阳性材料 | 第30页 |
| ·引物 | 第30-31页 |
| ·分子生物学试剂 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-41页 |
| ·溶液的配置 | 第31-33页 |
| ·制备感受态细胞用试剂的配制: | 第31-32页 |
| ·培养基的配制: | 第32页 |
| ·质粒提取试剂的配制: | 第32-33页 |
| ·电泳胶的制备 | 第33页 |
| ·实验技术 | 第33-41页 |
| ·实验路线 | 第33页 |
| ·待检材料阳性鉴定 | 第33-34页 |
| ·猪瘟病毒RNA的提取 | 第34页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第34-35页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·E2基因克隆至pMD18-T载体 | 第36-38页 |
| ·E2基因亚克隆至pACSG2转移载体上 | 第38-41页 |
| 结果 | 第41-45页 |
| 1 E2基因RT-PCR结果: | 第41-42页 |
| 2 pMD18-T-E2重组质粒的酶切和PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3 pMD18-T-E2重组质粒中E2基因序列鉴定: | 第43-44页 |
| 4 pACSG2-E2重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-48页 |
| 1 引物设计 | 第45页 |
| 2 克隆重组质粒酶切 | 第45-46页 |
| 3 氨基酸序列分析 | 第46页 |
| 4 选用杆状病毒表达载体系统来表达E2蛋白的可行性 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 研究二: 猪瘟病毒在体外对猪肾细胞(PK-15、PK-IBRS2)诱导凋亡的初步研究 | 第49-65页 |
| 1 材料 | 第50-52页 |
| ·病毒与细胞 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要器材 | 第50-51页 |
| ·细胞培养基及所用溶液的配置 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| ·细胞培养 | 第52-54页 |
| ·细胞冻存 | 第52页 |
| ·细胞复苏 | 第52-53页 |
| ·细胞培养 | 第53页 |
| ·细胞传代 | 第53页 |
| ·细胞培养中的培养液全换方法 | 第53页 |
| ·细胞接种病毒 | 第53页 |
| ·细胞记数 | 第53-54页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡核DNA | 第54-55页 |
| ·试剂配置 | 第54页 |
| ·凋亡细胞核DNA提取 | 第54-55页 |
| ·结果判断 | 第55页 |
| ·实验分组 | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-60页 |
| 讨论 | 第60-64页 |
| 1 选用细胞 | 第60页 |
| 2 琼脂糖凝胶电泳法 | 第60页 |
| 3 结果分析 | 第60-61页 |
| 4 凝胶浓度 | 第61页 |
| 5 细胞培养中的各因素 | 第61-62页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·细胞分散剂 | 第61-62页 |
| ·细胞密度 | 第62页 |
| 6 影响细胞凋亡的因素 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
