| 第一章 实验材料 | 第1页 |
| ·寡核苷酸引物设计及合成 | 第14页 |
| ·表达载体、菌株及分子克隆试剂 | 第14页 |
| ·细胞株、细胞培养相关试剂 | 第14页 |
| ·实验动物 | 第14页 |
| 第二章 主要溶液及试剂配制 | 第14-22页 |
| ·RNA提取用试剂 | 第14页 |
| ·DNA分析用试剂 | 第14-15页 |
| ·碱变性法质粒DNA提取溶液 | 第15-16页 |
| ·DNA回收试剂 | 第16页 |
| ·细菌培养用试剂 | 第16-17页 |
| ·蛋白质分析用试剂 | 第17-18页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第18页 |
| ·抗体检测的试剂 | 第18-19页 |
| ·抗体亚类鉴定试剂 | 第19页 |
| ·抗体纯化的试剂 | 第19-20页 |
| ·辣根过氧化物酶标记纯化抗体IgG所用试剂 | 第20页 |
| ·抗体鉴定的试剂(Western blot法) | 第20-21页 |
| ·细胞化学试剂 | 第21-22页 |
| 第三章 主要仪器与设备 | 第22页 |
| 第四章 NSE的基因克隆及重组质粒的构建 | 第22-26页 |
| ·人肺癌细胞A549的培养 | 第22-23页 |
| ·TRIZOL法提取肺癌细胞A549总RNA | 第23页 |
| ·RT--PCR扩增NSE目的基因 | 第23-24页 |
| ·NSE- PCR产物的纯化及回收 | 第24页 |
| ·回收后的NSE 加“A”尾 | 第24页 |
| ·NSE 加“A”尾后与pGEM-T载体连接 | 第24页 |
| ·CaCl2感受态细菌JM109的制备及连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·pGEM-T-NSE质粒DNA的小量制备及内切酶消化鉴定 | 第25-26页 |
| 第五章 原核表达载体pMS-NSE的构建 | 第26-29页 |
| ·原核表达质粒载体pMS-31b DNA的大量制备 | 第26-27页 |
| ·质粒pGEM-T-NSE及pMS-31b DNA的酶切 | 第27页 |
| ·酶切片段的回收 | 第27-28页 |
| ·pMS-31b与NSE连接 | 第28页 |
| ·CaCl2 法制备感受态细菌POP2136及连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·质粒pMS-NSE DNA的小量制备及内切酶消化鉴定 | 第29页 |
| 第六章 MS2-NSE融合蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第29-31页 |
| ·MS2-NSE融合蛋白的诱导和表达 | 第29-30页 |
| ·MS2-NSE融合蛋白的大量制备、纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| 第七章 抗NSE单克隆抗体的制备 | 第31-33页 |
| ·抗原 | 第31页 |
| ·动物及动物免疫 | 第31页 |
| ·小鼠免疫方法 | 第31页 |
| ·细胞融合 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆筛选及亚克隆 | 第32-33页 |
| ·抗NSE McAbs 亚类测定 | 第33页 |
| 第八章 抗NSE单克隆抗体的纯化和酶标 | 第33-35页 |
| ·小鼠杂交瘤腹水的制备及收集 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第33-34页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记纯化NSE McAb (IgG2a) | 第34-35页 |
| 第九章 抗NSE单克隆抗体的鉴定 | 第35-39页 |
| ·10%SDS-PAGE电泳鉴定纯化的抗NSE McAb | 第35页 |
| ·纯化抗NSE McAb效价的测定 | 第35-36页 |
| ·HRP－NSE McAb效价的测定 | 第36页 |
| ·抗NSE McAb特异性检测 | 第36页 |
| ·Western blot 检测NSE在肿瘤细胞中的表达 | 第36-37页 |
| ·细胞化学方法检测NSE在肿瘤细胞株中的表达 | 第37-39页 |
| 第十章 实 验 结 果 | 第39-51页 |
| ·NSE 的RT-PCR扩增及重组质粒的构建 | 第39-42页 |
| ·MS2-NSE融合蛋白的表达和纯化 | 第42-43页 |
| ·小鼠抗人NSE McAb的制备、纯化及鉴定 | 第43-51页 |
| 第十一章 讨 论 | 第51-55页 |
| 第十二章 小 结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 综述 | 第60-72页 |
| 个人简历 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
