| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| ·轮状病毒研究概况 | 第12-16页 |
| ·病毒的基本特性 | 第12-13页 |
| ·病毒蛋白 | 第13-14页 |
| ·基因组结构 | 第14-15页 |
| ·RV流行现状 | 第15-16页 |
| ·轮状病毒疫苗研究进展 | 第16-21页 |
| ·第一代轮状病毒疫苗-轮状病毒口服减毒活疫苗 | 第16-17页 |
| ·第二代轮状病毒疫苗-多价重组疫苗 | 第17-18页 |
| ·第三代轮状病毒疫苗 | 第18-19页 |
| ·其它进展 | 第19-21页 |
| ·干扰素研究概况 | 第21-24页 |
| ·干扰素的研究进展 | 第21-22页 |
| ·干扰素的分类 | 第22页 |
| ·干扰素诱导细胞产生的抗病毒翻译途径 | 第22-23页 |
| ·干扰素可治疗的疾病 | 第23页 |
| ·干扰素转基因植物的研究情况 | 第23-24页 |
| ·融合基因研究进展 | 第24-28页 |
| ·利用融合蛋白对目的基因进行示踪，研究其表达调控特征及生理功能 | 第24-25页 |
| ·利用融合基因增强目的基因的表达 | 第25-26页 |
| ·利用融合蛋白改变目的蛋白的免疫原性，产生无毒疫苗 | 第26页 |
| ·相同或相似功能的基因融合，增强基因的功能 | 第26-28页 |
| ·轮状病毒中和抗原结合干扰素共同对付轮状病毒腹泻的探讨 | 第28-31页 |
| 研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 技术路线 | 第30-31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-55页 |
| ·材料与试剂 | 第31页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·目的基因 | 第31页 |
| ·试剂和药品 | 第31页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第31-45页 |
| ·linker序列与引物的设计 | 第31-32页 |
| ·linker序列 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·重组PCR构建VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的模式和原理 | 第32-35页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因构建模式 | 第32页 |
| ·重组PCR反应原理 | 第32页 |
| ·重组PCR构建VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的流程图 | 第32页 |
| ·重组PCR反应体系和反应条件 | 第32-35页 |
| ·初次PCR | 第33-34页 |
| ·初次PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| ·重叠延伸反应 | 第35页 |
| ·重叠延伸反应产物的回收 | 第35页 |
| ·T-载体克隆与鉴定 | 第35-39页 |
| ·重叠延伸反应产物与T-载体连接 | 第35-36页 |
| ·宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·连接产物转化宿主菌E.coli DH5α的感受态细胞 | 第36-37页 |
| ·pEGM-T/VP_7-LK-IFN_(a-2b)克隆载体质粒的酶切鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·质粒的纯化 | 第38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121植物表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·线性化pBI121载体的制备 | 第39-40页 |
| ·线性化载体与VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因片段的连接 | 第40页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121重组载体的筛选 | 第40-41页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·农杆菌工程菌株的构建 | 第41-45页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121转化农杆菌EHA105 | 第42页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2b)/pBI121质粒的农杆菌工程菌的筛选与鉴定 | 第42-45页 |
| ·农杆菌质粒提取 | 第42-43页 |
| ·斑点杂交所需试剂的配制 | 第43-44页 |
| ·探针制备 | 第44页 |
| ·杂交 | 第44页 |
| ·洗膜 | 第44-45页 |
| ·底物反应 | 第45页 |
| ·植物基因转化 | 第45-49页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·外植体来源 | 第46页 |
| ·组织培养 | 第46页 |
| ·Kan梯度预实验 | 第46页 |
| ·番茄生根梯度实验 | 第46页 |
| ·以农杆菌为介导，通过叶盘法将外源基因导入番茄 | 第46-49页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第47页 |
| ·叶盘法转化番茄 | 第47-49页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第49-52页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR鉴定转基因植株 | 第50页 |
| ·PCR-Southern Blot检测 | 第50-52页 |
| ·Southern Blot检测 | 第52页 |
| ·转基因植物中外源基因表达蛋白的SDS-PAGE | 第52-55页 |
| ·转基因植物蛋白的提取 | 第52-53页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第53-54页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-65页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2b)融合基因的构建 | 第55-56页 |
| ·初次PCR反应 | 第55页 |
| ·重叠延伸反应 | 第55-56页 |
| ·VP_7-LK-IFN_(a-2d)/pBI121植物表达载体的构建 | 第56页 |
| ·农杆菌工程菌株的构建 | 第56-57页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第57-62页 |
| ·不同基因型外植体的再生能力 | 第57-58页 |
| ·外植体对Kan的敏感性 | 第58-59页 |
| ·外植体预培养 | 第59页 |
| ·最佳侵染时间和AS浓度的确定 | 第59-61页 |
| ·番茄转化植株的筛选 | 第61-62页 |
| ·番茄遗传转化的检测 | 第62-64页 |
| ·PCR检测和PCR-Southern检测 | 第62-63页 |
| ·Southern blot检测 | 第63-64页 |
| ·转基因植物表达产物-蛋白质SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-69页 |
| ·关于重组PCR(recombinant PCR)技术 | 第66页 |
| ·融合蛋白表达的重要性与可行性 | 第66-67页 |
| ·关于受体植物的选择 | 第67页 |
| ·Southern blot结果与Protein expression的不一致性 | 第67-69页 |
| 6 参考文献 | 第69-77页 |
| 7 附录1 | 第77-78页 |
| 8 附录2 | 第78-82页 |
| 9 附图 | 第82-86页 |
| 10 致谢 | 第86页 |
