| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-45页 |
| 一、 性别决定的研究历程 | 第15-19页 |
| (一) H-Y抗原性别决定假说 | 第16页 |
| (二) Bkm序列决定假说 | 第16页 |
| (三) ZFY基因性别决定假说 | 第16-17页 |
| (四) SRY基因性别决定假说 | 第17-18页 |
| (五) 参与性别决定的其他基因家族 | 第18-19页 |
| 二、 鱼类性别决定的研究进展 | 第19-27页 |
| (一) 环境决定类型 | 第19-21页 |
| 1 环境温度和pH决定型 | 第19-20页 |
| 2 性别的行为决定 | 第20-21页 |
| (二) 基因决定类型 | 第21-22页 |
| (三) 鱼类的性染色体分化 | 第22-23页 |
| (四) 性染色体的研究途径 | 第23-27页 |
| 1 表型特征 | 第23页 |
| 2 人为诱导鱼类的性逆转 | 第23-24页 |
| 3 染色体核型分析和显带 | 第24页 |
| 4 减数分裂联会复合体(SC)的观察 | 第24-25页 |
| 5 蛋白标记 | 第25页 |
| 6 比较基因组杂交 | 第25-26页 |
| 7 DNA标记 | 第26-27页 |
| 三、 染色体显微操作技术及其研究进展 | 第27-32页 |
| (一) 染色体显微操作技术原理 | 第27-29页 |
| 1 染色体的制备 | 第27-28页 |
| 2 染色体的显微分离 | 第28页 |
| 3 分离染色体DNA的扩增 | 第28-29页 |
| (二) 染色体显微操作技术的应用前景 | 第29-30页 |
| (三) 染色体显微操作技术的研究进展 | 第30-32页 |
| (四) 染色体显微操作技术在鱼类染色体研究中的运用 | 第32页 |
| 四、 荧光原位杂交技术(FISH)及其进展 | 第32-36页 |
| (一) 荧光原位杂交技术 | 第32-33页 |
| (二) FISH在遗传学上的应用 | 第33-35页 |
| (三) FISH在鱼类遗传学中的应用 | 第35-36页 |
| 1 基因定位研究 | 第35页 |
| 2 性别鉴定相关研究 | 第35-36页 |
| 3 染色体变异和进化的研究 | 第36页 |
| 4 种间杂交相关研究 | 第36页 |
| 五、 本研究涉及到的基因和序列的研究状况 | 第36-43页 |
| (一) Sox基因家族 | 第36-40页 |
| 1 Sox基因家族的发现和命名 | 第37页 |
| 2 Sox基因家族的功能 | 第37-40页 |
| (二) 高度重复序列 | 第40-43页 |
| 六、 本研究的目的和意义 | 第43-45页 |
| 材料和方法 | 第45-61页 |
| 一、 实验材料 | 第45-50页 |
| (一) 实验动物 | 第45页 |
| (二) 主要试剂及来源 | 第45-46页 |
| (三) 引物 | 第46页 |
| (四) 本实验使用的溶液及配方 | 第46-50页 |
| 二、 实验方法 | 第50-61页 |
| 1 鱼类有丝分裂染色体的制备 | 第50页 |
| 2 鱼类基因组DNA的制备 | 第50-51页 |
| 3 刺鳅基因组DNA的超声波处理 | 第51页 |
| 4 刺鳅X染色体的显微分离和DOP-PCR扩增 | 第51-52页 |
| 5 X染色体DNA文库的建立 | 第52-53页 |
| 6 文库及重组隆质粒DNA的提取和纯化 | 第53页 |
| 7 文库质粒插入片段的制备、纯化和检测以及重组质粒的酶切分析 | 第53页 |
| 8 X染色体文库生物素探针的制备 | 第53-54页 |
| 9 X染色体生物素探针标记效率的检测 | 第54页 |
| 10 刺鳅X染色体探针对基因组DNA的Southern杂交 | 第54-55页 |
| 11 刺鳅X染色体探针的染色体反向涂绘 | 第55-56页 |
| 12 刺鳅X染色体探针对乌鳢、鳜鱼染色体涂绘研究 | 第56页 |
| 13 刺鳅X染色体上重复序列的筛选和FISH分析 | 第56-58页 |
| 14 Sox兼并引物对刺鳅基因组DNA的PCR扩增 | 第58页 |
| 15 刺鳅Sox基因PCR扩增产物的琼脂糖凝胶纯化与回收 | 第58页 |
| 16 刺鳅Sox基因PCR扩增产物与载体的连接 | 第58页 |
| 17 刺鳅Sox基因PCR产物的克隆 | 第58-59页 |
| 18 Sox基因片段克隆质粒的提取和酶切分析 | 第59页 |
| 19 Sox基因片段的SSCP分析和测序分析 | 第59-60页 |
| 20 原位杂交信号的统计分析 | 第60-61页 |
| 结果 | 第61-77页 |
| 一、 刺鳅X染色体的显微分离、文库的建立和检测 | 第61-64页 |
| (一) X性染色体的显微分离 | 第61页 |
| (二) DOP-PCR扩增刺鳅X染色体DNA | 第61-62页 |
| (三) X染色体DOP-PCR产物文库的建立 | 第62页 |
| (四) 文库重组质粒的PCR检测和酶切分析 | 第62-63页 |
| (五) 刺鳅X染色体文库插入片段生物素标记效率的检测 | 第63-64页 |
| (六) 刺鳅X染色体文库探针对刺鳅基因组DNA的Southern杂交 | 第64页 |
| 二、 刺鳅X染色体文库探针对刺鳅和其他鱼类的染色体涂绘分析 | 第64-67页 |
| (一) 刺鳅X染色体文库探针对刺鳅染色体的反向涂绘 | 第64-66页 |
| 1 对雌性和雄性刺鳅染色体的非抑制性FISH分析 | 第64-65页 |
| 2 对雄性和雌性刺鳅染色体的抑制性FISH分析 | 第65-66页 |
| (二) 刺鳅X染色体探针对乌鳢和鳜鱼的染色体涂绘 | 第66-67页 |
| 1 刺鳅X染色体探针对乌鳢有丝分裂染色体的涂绘 | 第66-67页 |
| 2 刺鳅Xcp对鳜鱼有丝分裂染色体的涂绘 | 第67页 |
| 三、 刺鳅X染色体上重复序列的筛选和FISH分析 | 第67-71页 |
| 四、 刺鳅基因组中Sox基因的分析 | 第71-77页 |
| (一) Sox兼并引物对刺鳅基因组的扩增 | 第71-72页 |
| (二) 刺鳅Sox基因片段的克隆、酶切分析和SSCP分析 | 第72-73页 |
| (三) 刺鳅Sox基因的序列分析 | 第73-77页 |
| 讨论 | 第77-98页 |
| 一、 关于刺鳅的细胞遗传学研究 | 第77-81页 |
| 二、 刺鳅的性染色体的研究 | 第81-89页 |
| 1 刺鳅性染色体的分化 | 第81-84页 |
| 2 刺鳅性染色体上异染色质的研究 | 第84-89页 |
| 三、 刺鳅X染色体探针对乌鳢和鳜鱼的涂绘研究 | 第89-93页 |
| 四、 刺鳅的Sox基因分析 | 第93页 |
| 五、 关于建立刺鳅X染色体文库和FISH杂交的技术探讨 | 第93-98页 |
| (一) 刺鳅X染色体文库的建立 | 第93-96页 |
| (二) 关于FISH分析 | 第96-98页 |
| 小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-124页 |
| 在读期间发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
