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人表皮生长因子基因的克隆、表达及其在植物中的遗传转化研究

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
第一部分 文献综述第10-24页
 1 植物医药基因工程研究进展第10-13页
  1.1 利用植物表达异源蛋白的研究进展第10-11页
  1.2 关于外源蛋白受体系统和表达系统第11页
  1.3 表皮生长因子(EGF)的分子生物学第11-13页
 2 植物基因工程技术体系的建立第13-24页
  2.1 目的基因的克隆技术第13页
  2.2 外源基因植物表达载体的构建第13-15页
  2.3 转化体的筛选与鉴定第15页
  2.4 农杆菌介导的单子叶植物遗传转化分子基础及研究进展第15-22页
   2.4.1 农杆菌介导植物遗传转化的发展概述第15页
   2.4.2 农杆菌介导植物遗传转化的分子机理第15-16页
   2.4.3 农杆菌介导植物遗传转化的优点第16页
   2.4.4 影响单子叶植物农杆菌转化的因素第16-21页
   2.4.5 农杆菌介导单子叶植物遗传转化的研究进展第21-22页
  2.5 基因枪介导的转化技术第22页
   2.5.1 基因枪转化的工作原理第22页
   2.5.2 影响基因枪转化频率的因素第22页
  2.6 转基因遗传研究第22-24页
第二部分 香蕉遗传转化研究第24-60页
 第一章 香蕉遗传转化研究进展第24-27页
  1.1 香蕉遗传转化受体系统的研究第24页
  1.2 香蕉基因工程的研究进展第24-25页
  1.3 本研究的目的意义及内容第25-27页
 第二章 材料与方法第27-40页
  2.1 材料第27-30页
   2.1.1 植物材料第27页
   2.1.2 菌株与质粒第27页
   2.1.3 工具酶第27页
   2.1.4 主要化学试剂第27-28页
   2.1.5 主要仪器第28页
   2.1.6 主要溶液的配制第28-30页
   2.1.7 香蕉组织培养基及转化用培养基第30页
   2.1.8 动物实验材料第30页
  2.2 方法第30-40页
   2.2.1 hEGF基因的克隆第30-31页
   2.2.2 EGF的原核表达和EGF的纯化第31-32页
   2.2.3 抗血清的制备和ELISA检测第32-33页
   2.2.4 植物双元表达质粒的构建第33-35页
   2.2.5 双元表达质粒转化农杆菌第35页
   2.2.6 农杆菌转化子的鉴定第35-36页
   2.2.7 PCR扩增法制备生物素(地高辛)探针与纯化第36-37页
   2.2.8 基础抗性的测定第37页
   2.2.9 农杆菌法转化第37页
   2.2.10 基因枪法转化第37-38页
   2.2.11 转化体的筛选第38页
   2.2.12 转化体的分子检测第38-40页
 第三章 结果与分析第40-60页
  3.1 人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定以及表达质粒构建第40-45页
   3.1.1 人表皮生长因子(hEGF)基因的合成第40-41页
   3.1.2 hEGF基因表达质粒载体构建第41页
   3.1.3 纯化hEGF蛋白活性分析第41-43页
   3.1.4 小鼠血清ELISA检测结果第43页
   3.1.5 小鼠血清dot-blotting杂交检测第43-45页
  3.2 农杆菌介导的香蕉遗传转化第45-60页
   3.2.1 香蕉再生系统的优化第45-50页
   3.2.2 植物表达质粒导入农杆菌第50-52页
   3.2.3 香蕉转化条件的优化第52-56页
   3.2.4 香蕉转化方法的确定第56-57页
   3.2.5 筛选剂的选择第57页
   3.2.6 转化体的筛选第57-58页
   3.2.7 程序化的转化和筛选第58-59页
   3.2.8 转化体的分子检测第59-60页
第三部分 芦荟遗传转化体系的研究第60-77页
 第一章 前言第60-61页
  1.1 芦荟的应用价值第60页
  1.2 芦荟生物技术研究进展第60-61页
 第二章 材料与方法第61-62页
  2.1 材料第61页
  2.2 方法第61-62页
 第三章 结果与分析第62-77页
  3.1 芦荟再生系统的优化第62-69页
  3.2 芦荟转化条件的优化第69-73页
  3.3 程序化的转化与筛选第73-77页
第四部分 讨论和结论第77-84页
 第一章 讨论第77-82页
  1.1 关于遗传转化受体系统第77-78页
  1.2 关于影响农杆菌转化的因素第78-79页
  1.3 关于抑菌性抗生素的影响第79页
  1.4 关于调控元件第79页
  1.5 关于选择标记第79-80页
  1.6 转基因香蕉生产医药蛋白的可行性第80页
  1.7 关于转化方法第80页
  1.8 关于工作的延续性第80-82页
 第二章 结论第82-84页
参考文献第84-99页
致谢第99页

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