| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 1 前言与文献综述 | 第7-39页 |
| 1．1 植物的抗病育种 | 第8-13页 |
| 1．1．1 抗病育种的重要性 | 第8-9页 |
| 1．1．2 抗病性的类型和机制 | 第9-10页 |
| 1．1．3 抗病育种的常规方法 | 第10-13页 |
| 1．1．4 抗病育种的基因工程策略 | 第13页 |
| 1．2 植物抗病毒基因工程 | 第13-16页 |
| 1．2．1 病毒外壳蛋白基因介导的抗性 | 第13-14页 |
| 1．2．2 病毒复制酶基因介导的抗性 | 第14页 |
| 1．2．3 病毒卫星RNA策略 | 第14页 |
| 1．2．4 核糖体失活蛋白基因 | 第14-15页 |
| 1．2．5 干扰素基因 | 第15页 |
| 1．2．6 缺陷干扰颗粒 | 第15页 |
| 1．2．7 病毒反义RNA策略 | 第15页 |
| 1．2．8 病毒移动蛋白基因介导的抗性 | 第15-16页 |
| 1．2．9 利用与昆虫介体传播相关的基因 | 第16页 |
| 1．2．10 利用植物体内的抗病毒基因 | 第16页 |
| 1．2．11 抗病毒转基因番茄 | 第16页 |
| 1．3 核糖体失活蛋白 | 第16-24页 |
| 1．3．1 核糖体失活蛋白的种类 | 第16-19页 |
| 1．3．2 核糖体失活蛋白的作用机制及其对核糖体的作用 | 第19-21页 |
| 1．3．3 核糖体失活蛋白的抗病毒活性 | 第21-22页 |
| 1．3．4 核糖体失活蛋白对真菌和昆虫的作用 | 第22-23页 |
| 1．3．5 小结 | 第23-24页 |
| 1．4 美洲商陆抗病毒蛋白 | 第24-32页 |
| 1．4．1 PAP的发现及其cDNA的克隆 | 第24-25页 |
| 1．4．2 PAP的酶活性功能 | 第25-26页 |
| 1．4．3 PAP的细胞毒性 | 第26-28页 |
| 1．4．4 PAP的抗病毒活性 | 第28-31页 |
| 1．4．5 PAP的抗真菌活性 | 第31-32页 |
| 1．4．6 小结 | 第32页 |
| 1．5 植物基因工程常用的启动子及其特点 | 第32-36页 |
| 1．5．1 组成性启动子 | 第33-34页 |
| 1．5．2 组织特异性启动子 | 第34页 |
| 1．5．3 诱导型启动子 | 第34-36页 |
| 1．6 转基因作物的安全性 | 第36-37页 |
| 1．7 本研究的技术路线及其意义 | 第37-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-52页 |
| 2．1 美洲商陆抗病毒蛋白cDNA的克隆与测序 | 第39-43页 |
| 2．1．1 材料 | 第39页 |
| 2．1．2 方法 | 第39-43页 |
| 2．2 植物表达载体的构建 | 第43页 |
| 2．3 番茄rbcS-3A启动子的克隆与测序 | 第43-44页 |
| 2．3．1 番茄总DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2．3．2 引物设计 | 第44页 |
| 2．3．3 PCR扩增及其克隆 | 第44页 |
| 2．4 植物特异表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 2．5 农杆菌介导的番茄遗传转化 | 第45-49页 |
| 2．5．1 三亲交配法将植物表达载体导入农杆菌LBA4404 | 第45-47页 |
| 2．5．2 番茄的组织培养 | 第47页 |
| 2．5．3 Kan梯度预试验 | 第47-48页 |
| 2．5．4 农杆菌液的准备 | 第48-49页 |
| 2．5．5 叶盘法转化番茄 | 第49页 |
| 2．6 转基因植株的检测与田间表现 | 第49-52页 |
| 2．6．1 转化植株PCR检测 | 第49页 |
| 2．6．2 转化植株的Southern检测 | 第49-51页 |
| 2．6．3 转基因植株的RT-PCR检测 | 第51页 |
| 2．6．4 转基因植株的田间性状记载 | 第51页 |
| 2．6．5 转基因植株的人工接种病毒鉴定 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-65页 |
| 3．1 美洲商陆抗病毒蛋白cDNA的克隆与测序 | 第52-55页 |
| 3．1．1 植物总RNA的提取 | 第52页 |
| 3．1．2 PAP cDNA的PCR扩增 | 第52-53页 |
| 3．1．3 PCR产物的克隆 | 第53页 |
| 3．1．4 克隆片段的序列测定 | 第53-55页 |
| 3．2 植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3．2．1 用PAP-c构建的植物表达载体 | 第55页 |
| 3．2．2 用PAP构建的植物表达载体 | 第55-56页 |
| 3．3 番茄rbcS-3A启动子的克隆与测序 | 第56-58页 |
| 3．3．1 番茄rbcS-3A启动子的PCR扩增 | 第56页 |
| 3．3．2 测序结果 | 第56-58页 |
| 3．4 植物特异表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 3．5 三亲交配法将重组质粒导入根癌农杆菌 | 第59页 |
| 3．6 番茄叶盘出愈和分化的Kan梯度试验 | 第59-60页 |
| 3．6．1 不同基因型外植体的再生能力 | 第59-60页 |
| 3．6．2 外植体对卡那霉素的敏感性 | 第60页 |
| 3．7 番茄转化植株的筛选 | 第60-61页 |
| 3．8 再生植株的PCR检测 | 第61-62页 |
| 3．9 Southern杂交 | 第62页 |
| 3．10 转基因植株的RT-PCR检测 | 第62-63页 |
| 3．11 转基因植株的形态特征及其对病毒的抗性 | 第63-65页 |
| 3．11．1 转基因植株的形态特征 | 第63页 |
| 3．11．2 转基因植株对病毒的抗性 | 第63-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-69页 |
| 5．1 关于番茄的遗传转化体系 | 第66页 |
| 5．2 美洲商陆抗病毒蛋白在植物抗病毒基因工程中的应用 | 第66-67页 |
| 5．3 番茄rbcS-3A启动子的特点 | 第67-68页 |
| 5．4 外源基因在转基因植物中的表达 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 英文摘要 | 第76-78页 |
| 附件 | 第78-82页 |
| 缩写词 | 第82-83页 |
| 彩版 | 第83-84页 |
