| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-22页 |
| 材料和方法 | 第22-35页 |
| 1 材料 | 第22-29页 |
| 1．1 菌种与质粒 | 第22-23页 |
| 1．2 培养基 | 第23-25页 |
| 1．3 试剂 | 第25-26页 |
| 1．4 缓冲液 | 第26-28页 |
| 1．5 仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-35页 |
| 2．1 大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第29页 |
| 2．2 大肠杆菌质粒DNA大量提取 | 第29页 |
| 2．3 链霉菌质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2．4 链霉菌总DNA的提取 | 第30页 |
| 2．5 大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备和DNA转化 | 第30-31页 |
| 2．6 黑暗链霉菌原生质体的制备、再生及质粒DNA转化 | 第31-32页 |
| 2．7 DNA酶切和连接 | 第32页 |
| 2．8 DNA电泳和片段回收 | 第32-33页 |
| 2．9 双链质粒DNA变性处理制备单链DNA | 第33页 |
| 2．10 黑暗链霉菌发酵及产物检测操作的实验方法 | 第33-34页 |
| 2．11 接合转移实验 | 第34页 |
| 2．12 电转化实验 | 第34-35页 |
| 实验结果 | 第35-56页 |
| 第一部分 黑暗链霉菌原生质体的制备和再生 | 第35-42页 |
| 1 菌丝培养基对黑暗链霉菌9904原生质体形成的影响 | 第35-36页 |
| 2 菌丝培养条件的选择 | 第36-38页 |
| 2．1 不同培养温度对原生质体形成和再生的影响 | 第36-37页 |
| 2．2 甘氨酸浓度对菌丝体生长、原生质体形成及再生的影响 | 第37-38页 |
| 3 酶解系统适宜条件的选择 | 第38-40页 |
| 3．1 溶菌酶浓度对黑暗链霉菌9904原生质体形成和再生的影响 | 第38页 |
| 3．2 酶解温度对原生质体形成和再生的影响 | 第38-39页 |
| 3．3 酶解时间对原生质体形成和再生的影响 | 第39-40页 |
| 4 再生条件的选择 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 黑暗链霉菌基因转移系统的建立 | 第42-56页 |
| 1 抗性标记的选择 | 第42页 |
| 2 PEG-介导的质粒DNA转化黑暗链霉菌原生质体 | 第42-49页 |
| 2．1 质粒DNA直接转化黑暗链霉菌9904原生质体 | 第42-43页 |
| 2．2 影响质粒转化因素的考察 | 第43-45页 |
| 2．2．1 原生质体和质粒DNA浓度 | 第43页 |
| 2．2．2 PEG浓度及分子量 | 第43-44页 |
| 2．2．3 缓冲液 | 第44页 |
| 2．2．4 菌丝培养时间 | 第44页 |
| 2．2．5 硫链丝菌素选择时间 | 第44-45页 |
| 2．3 内源性质粒 | 第45页 |
| 2．4 DNase灭活及质粒DNA的转化 | 第45-48页 |
| 2．5 限制—修饰系统 | 第48-49页 |
| 3 接合转移系统 | 第49-53页 |
| 3．1 利用接合转移成功地将质粒pHZ132转入黑暗链霉菌9904中 | 第49-53页 |
| 3．2 用经黑暗链霉菌自身修饰的质粒可以转化9904菌株的原生质体 | 第53页 |
| 4 电转化 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71页 |
