| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 部分缩略语表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-23页 |
| 1 玉米丝黑穗病的研究进展 | 第13-16页 |
| ·玉米丝黑穗病的分布与危害 | 第13页 |
| ·玉米丝黑穗病在我国的分布 | 第13页 |
| ·玉米丝黑穗病的危害 | 第13页 |
| ·玉米丝黑穗病病原菌的生理小种分化 | 第13-14页 |
| ·玉米丝黑穗病的症状与鉴定方法 | 第14-16页 |
| ·症状 | 第14-15页 |
| ·鉴定方法 | 第15-16页 |
| ·玉米丝黑穗病病原菌的侵染机制研究 | 第16页 |
| 2 随机扩增多态性DNA(RAPD)研究进展 | 第16-18页 |
| ·RAPD技术简介 | 第16-17页 |
| ·RAPD技术在真菌研究中的应用 | 第17-18页 |
| 3 真菌的遗传转化研究进展 | 第18-20页 |
| ·根癌农杆菌介导的真菌的遗传转化 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌介导转化真菌的分子生物学原理 | 第18页 |
| ·影响转化的因素 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化在真菌中的应用 | 第19页 |
| ·真菌的原生质体转化 | 第19-20页 |
| ·影响原生质体转化的因素 | 第19-20页 |
| ·原生质体转化在真菌中的应用 | 第20页 |
| 4 绿色荧光蛋白(GFP)作为生物标记在病原真菌中的应用 | 第20-21页 |
| 5 本课题研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第一章 北方玉米丝轴黑粉菌的遗传多样性研究 | 第23-36页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·玉米丝轴黑粉菌的分离 | 第23-24页 |
| ·DNA的提取及纯化 | 第24-25页 |
| ·DNA的检测 | 第25页 |
| ·PCR反应 | 第25-26页 |
| ·电泳检测和数据处理 | 第26-27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-33页 |
| ·玉米丝轴黑粉菌的特异引物检测 | 第27页 |
| ·丝轴黑粉菌的遗传多态性分析 | 第27-28页 |
| ·种群间遗传距离和遗传相似性 | 第28页 |
| ·种群间遗传分化 | 第28-30页 |
| ·基因流的影响 | 第30页 |
| ·种群和个体间遗传聚类关系 | 第30-32页 |
| ·主坐标分析 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-36页 |
| 第二章 根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的遗传转化 | 第36-49页 |
| 1 材料与方法 | 第36-43页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·质粒载体 | 第36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-43页 |
| ·含重组质粒的农杆菌的制备与培养 | 第36-41页 |
| ·高效启动子gpd的扩增 | 第36-37页 |
| ·含高效启动子trpC，gpd的双元载体的构建 | 第37-40页 |
| ·质粒的大肠杆菌转化 | 第40页 |
| ·质粒的提取和鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒的根癌农杆菌转化 | 第41页 |
| ·农杆菌质粒酶切鉴定 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的遗传转化 | 第41-43页 |
| ·潮霉素抑制玉米丝轴黑粉菌生长的最低浓度的筛选 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的转化 | 第41-42页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·用于转化的根癌农杆菌最佳菌株的筛选 | 第42页 |
| ·用于转化的丝轴黑粉菌担孢子最佳成熟度的筛选 | 第42页 |
| ·用于转化的根癌农杆菌最佳浓度的筛选 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·扩增GPD启动子序列测序结果分析 | 第43页 |
| ·含trpC启动子载体的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·潮霉素抑制玉米丝轴黑粉菌生长的最低浓度的筛选 | 第44页 |
| ·转化子的潮霉素筛选 | 第44-45页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第45页 |
| ·用于转化的根癌农杆菌最佳菌株的筛选 | 第45-46页 |
| ·用于转化的丝轴黑粉菌担孢子最佳成熟度的筛选 | 第46页 |
| ·用于转化的根癌农杆菌最佳浓度的筛选 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 转化GFP菌株侵染玉米 | 第49-55页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·植物材料的准备 | 第49页 |
| ·转化菌株配对 | 第49-50页 |
| ·二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察 | 第50页 |
| ·幼苗期接种 | 第50页 |
| ·苗期PCR检测 | 第50页 |
| ·成熟期冬孢子检测 | 第50页 |
| ·切片制备 | 第50页 |
| ·普通显微镜镜检 | 第50-51页 |
| ·荧光共聚焦显微镜(LSCM)观察 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-53页 |
| ·DAPI染色观察 | 第51页 |
| ·幼苗期PCR检测 | 第51-52页 |
| ·玉米成熟期田间取样观察结果 | 第52页 |
| ·切片普通显微镜镜检结果 | 第52页 |
| ·切片荧光共聚焦显微镜镜检 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 总结 | 第55-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录1 试剂和培养基制备 | 第67-69页 |
| 附录2 大肠杆菌电转化感受态的制备 | 第69-70页 |
| 附录3 质粒的大肠杆菌转化 | 第70页 |
| 附录4 根癌农杆菌感受态的制备 | 第70-71页 |
| 附录5 质粒的根癌农杆菌转化 | 第71页 |
| 附录6 凝胶回收DNA片段(TaKaRa) | 第71-72页 |
| 附录7 碱裂解法提取质粒(小样法) | 第72-73页 |
| 附录8 大样法抽提高浓度质粒 | 第73页 |
| 附录9 用苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)进行DNA样品的纯化 | 第73-74页 |
| 附录10 PCR产物的纯化 | 第74页 |
| 附录11 克隆gpd序列比对结果 | 第74-78页 |