| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第一章 人骨肉瘤U-2 OS细胞MTX耐药株的建立及其生物学性状 | 第9-20页 |
| 一、材料 | 第9页 |
| 1.细胞株 | 第9页 |
| 2.实验试剂和仪器 | 第9页 |
| 二、方法 | 第9-13页 |
| 1.细胞培养液的配制 | 第10页 |
| 2.人骨肉瘤U-2 OS细胞的培养 | 第10-11页 |
| 3.U-2 OS耐MTX细胞亚系的诱导建立 | 第11页 |
| ·氨甲蝶呤诱导浓度的确定 | 第11页 |
| ·采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导细胞耐药 | 第11页 |
| 4.各细胞亚系的生物学特性观察 | 第11-13页 |
| ·细胞形态观察 | 第12页 |
| ·细胞生长曲线和倍增时间测定 | 第12页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第12-13页 |
| 5.各细胞亚系的药物敏感试验 | 第13页 |
| ·MTT法药敏实验原理 | 第13页 |
| ·采用MTT法检测各细胞亚系药物敏感度 | 第13页 |
| 三、结果 | 第13-20页 |
| 1.U-2 OS/R1～U-2 OS/R4耐药细胞株的建立 | 第13-14页 |
| 2.U-2 OS/R细胞的生物学特性观察 | 第14-16页 |
| ·U-2 OS及U-2 OS/R细胞形态 | 第14页 |
| ·U-2 OS细胞及各U-2 OS/R细胞亚系的生长曲线 | 第14-15页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期分布结果 | 第15-16页 |
| 3.体外药物敏感性 | 第16-17页 |
| 4.U-2 OS/R1～4细胞株对MTX耐药性的稳定性 | 第17-20页 |
| 第二章 各耐药细胞亚系(U-2 OS/R1～U-2 OS/R4)耐药相关基因的检测 | 第20-27页 |
| 一、材料 | 第20-21页 |
| 1.实验试剂 | 第20页 |
| 2.仪器 | 第20-21页 |
| 二、方法 | 第21-24页 |
| 1.样本总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.总RNA的浓度和纯度鉴定 | 第21页 |
| 3.RNA的完整性检查 | 第21-22页 |
| 4.总mRNA的反转录 | 第22-23页 |
| 5.目的基因RFC,DHFR mRNA的PCR扩增 | 第23页 |
| 6.PCR扩增产物凝胶电泳 | 第23-24页 |
| 三、结果 | 第24-27页 |
| 1.RFC,DHFR mRNA表达的检测结果 | 第24页 |
| 2.各细胞亚系RFC mRNA表达水平比较 | 第24-25页 |
| 3.各细胞亚系DHFR mRNA表达水平比较 | 第25-27页 |
| 讨论 | 第27-32页 |
| 结论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-35页 |
| 综述 | 第35-45页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第45-46页 |
| 附录 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
