| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-13页 |
| 1.1 枯草杆菌的特征及应用 | 第9-10页 |
| 1.2 磷壁酸结构与分类 | 第10页 |
| 1.3 磷壁酸在微生物体内的代谢 | 第10-11页 |
| 1.3.1 磷壁酸的生物合成 | 第10-11页 |
| 1.3.2 磷壁酸的生物降解 | 第11页 |
| 1.4 磷壁酸降解酶的性质及潜在应用 | 第11-13页 |
| 1.4.1 磷壁酸降解酶的催化性质 | 第11-12页 |
| 1.4.2 磷壁酸降解酶的潜在应用 | 第12-13页 |
| 2 引言 | 第13-14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-27页 |
| 3.1 主要药品 | 第14页 |
| 3.2 主要溶液及培养基的配制 | 第14-17页 |
| 3.3 主要仪器 | 第17页 |
| 3.4 菌株、质粒、和引物 | 第17-18页 |
| 3.5 重组质粒pET-21a-yobO和pET-21a-bsp的构建 | 第18页 |
| 3.6 重组质粒pET-28a-yobO、pET-28a-bsp的构建 | 第18-19页 |
| 3.7 重组质粒pHT43-yobO的构建 | 第19-20页 |
| 3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及化学转化 | 第20页 |
| 3.8.1 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 3.8.2 大肠杆菌的化学转化 | 第20页 |
| 3.9 枯草杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第20-21页 |
| 3.9.1 枯草杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| 3.9.2 枯草杆菌的电转化方法 | 第21页 |
| 3.10 yobO、bsp在大肠杆菌中的表达 | 第21页 |
| 3.11 yobO在枯草杆菌中的表达 | 第21-22页 |
| 3.12 蛋白纯化 | 第22-23页 |
| 3.12.1 镍离子亲和层析 | 第22页 |
| 3.12.2 Sephadex G-25凝胶层析 | 第22-23页 |
| 3.13 蛋白浓度的测定 | 第23页 |
| 3.14 溶液中无机磷含量的测定 | 第23-24页 |
| 3.15 磷壁酸的提取 | 第24页 |
| 3.16 细胞壁的提取 | 第24页 |
| 3.17 磷壁酸降解酶活力测定方法 | 第24-26页 |
| 3.17.1 以bis-pNPP为底物的活力测定 | 第24-25页 |
| 3.17.2 以磷壁酸为底物的活力测定 | 第25-26页 |
| 3.18 芽孢率的测定 | 第26页 |
| 3.19 菌体自溶能力测定 | 第26-27页 |
| 4 结果分析 | 第27-35页 |
| 4.1 候选磷壁酸降解酶基因的确定 | 第27-29页 |
| 4.1.1 枯草杆菌磷壁酸降解酶基因的预测 | 第27页 |
| 4.1.2 BSP和YobO二级结构预测及保守关键氨基酸分析 | 第27-28页 |
| 4.1.3 BSP和YobO的保守结构域分析 | 第28-29页 |
| 4.2 yobO与bsp在原核细胞中的表达 | 第29-30页 |
| 4.2.1 yobO与bsp在大肠杆菌中的表达 | 第29-30页 |
| 4.3 YobO与BSP的酶学性质 | 第30-33页 |
| 4.3.1 YobO与BSP的纯化 | 第30页 |
| 4.3.2 YobO与BSP的磷酸酯酶活性 | 第30-33页 |
| 4.4 敲除yobO对枯草杆菌生长的影响 | 第33-35页 |
| 4.4.1 yobO缺失对B.subtilis 168产芽孢能力的影响 | 第33-34页 |
| 4.4.2 yobO缺失对B.subtilis 168自溶能力的影响 | 第34-35页 |
| 5 结论与讨论 | 第35-38页 |
| 5.1 结论 | 第35页 |
| 5.2 讨论 | 第35-38页 |
| 参考文献 | 第38-45页 |
| 英文摘要 | 第45-47页 |
| 附录 | 第47-50页 |
