| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 前言 | 第16-21页 |
| 第一部分 重组大鼠4-1BBL基因真核表达载体的构建及功能鉴定 | 第21-39页 |
| 一、材料 | 第21-23页 |
| 1.细胞、菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.大鼠 | 第21页 |
| 3.试剂 | 第21-22页 |
| 4.引物 | 第22页 |
| 5.大鼠4-1BBL cDNA | 第22-23页 |
| 6.仪器 | 第23页 |
| 二、方法 | 第23-30页 |
| ·-1BBL基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.重组表达质粒的构建和鉴定 | 第24-27页 |
| 3.重组质粒转染HepG2细胞及阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| 4.重组大鼠4-1BBL基因的HepG2细胞鉴定 | 第27-29页 |
| 5.大鼠DCs细胞的分离培养 | 第29页 |
| 6.各组HepG2细胞与大鼠DCs共培养 | 第29页 |
| 7.共培养DCs细胞FCM表型和上清检测 | 第29页 |
| 8.统计学处理 | 第29-30页 |
| 三、结果 | 第30-36页 |
| 1.重组pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的鉴定 | 第30页 |
| 2.重组4-1BBL基因的HepG2细胞鉴定 | 第30页 |
| 3.大鼠DCs的形态学观察 | 第30-31页 |
| 4.共培养DCs的形态学观察和表面分子检测 | 第31页 |
| 5.混合培养上清中细胞因子检测 | 第31-36页 |
| 四、讨论 | 第36-37页 |
| 五、参考文献 | 第37-39页 |
| 第二部分 含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌构建及功能鉴定 | 第39-54页 |
| 一、材料 | 第39-40页 |
| 1.质粒、菌株和细胞 | 第39页 |
| 2.试剂 | 第39页 |
| 3.引物 | 第39-40页 |
| 4.仪器 | 第40页 |
| 二、方法 | 第40-43页 |
| 1.重组质粒转化减毒沙门氏菌LB5000 | 第40-41页 |
| 2.LB5000中抽提质粒电转化减毒沙门氏菌SL3261 | 第41页 |
| 3.含质粒减毒沙门氏菌的体外稳定和鉴定 | 第41-42页 |
| 4.含质粒减毒沙门氏菌的生长特性和形态学观察 | 第42页 |
| 5.含L质粒减毒沙门氏菌表面抗原和质粒稳定性检测 | 第42页 |
| 6.含质粒减毒沙门氏菌感染HepG2细胞 | 第42页 |
| 7.感染减毒沙门氏菌HepG2细胞的4-1BBL基因表达检测 | 第42-43页 |
| 8.统计学处理 | 第43页 |
| 三、结果 | 第43-52页 |
| 1.重组4-1BBL基因疫苗SL3261菌鉴定 | 第43-44页 |
| 2.含质粒减毒沙门氏菌表面抗原和培养过程中质粒稳定性检测 | 第44页 |
| 3.含质粒减毒沙门氏菌的生长特性和形态学观察结果 | 第44页 |
| 4.含质粒减毒沙门氏菌感染HepG2细胞 | 第44页 |
| 5.感染不同SL3261细菌HepG2细胞的绿荧光观察 | 第44-45页 |
| 6.感染不同SL3261细菌HepG2细胞的4-1BBL基因转录检测 | 第45页 |
| 7.感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞免疫双荧光观察 | 第45-52页 |
| 五、参考文献 | 第52-54页 |
| 第三部分 含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌对大鼠免疫功能的影响 | 第54-76页 |
| 一、材料 | 第55-56页 |
| 1.菌株 | 第55页 |
| 2.大鼠 | 第55页 |
| 3.试剂 | 第55页 |
| 4.引物 | 第55-56页 |
| 5.仪器 | 第56页 |
| 二、方法 | 第56-60页 |
| 1.SL3261菌感染大鼠 | 第56-57页 |
| 2.腹腔脏器的取材、观察 | 第57页 |
| 3.脾细胞分离 | 第57-58页 |
| 4.脾脏中报告基因GFP的检测 | 第58页 |
| 5.外周血淋巴细胞和脾细胞表型检测 | 第58-59页 |
| 6.伤寒肥达氏反应检测 | 第59页 |
| 7.脾细胞分泌IFN-γ的检测 | 第59页 |
| 8.免疫双荧光法检测组织中4-1BBL的表达 | 第59-60页 |
| 9.统计学处理 | 第60页 |
| 三、结果 | 第60-71页 |
| 1.大鼠脾细胞中报告基因GFP的转录和表达 | 第60页 |
| 2.外周血淋巴细胞表型检测和肥达氏反应 | 第60-61页 |
| 3.脾细胞流式细胞仪检测细胞表型结果 | 第61页 |
| 4.外周血和脾细胞4-1BB和4-1BBL检测结果 | 第61页 |
| 5.各组大鼠脾细胞经PHA刺激后分泌IFN-γ的检测结果 | 第61页 |
| 6.各组大鼠脾脏中4-1BBL的表达 | 第61-71页 |
| 四、讨论 | 第71-73页 |
| 五、参考文献 | 第73-76页 |
| 第四部分 实验性大鼠大肠癌时机体免疫功能的改变 | 第76-89页 |
| 一、材料 | 第76-77页 |
| 1.大鼠 | 第76页 |
| 2.试剂 | 第76-77页 |
| 二、方法 | 第77-80页 |
| 1.大鼠大肠癌模型的建立 | 第77页 |
| ·周时外周血细胞表型检测 | 第77-78页 |
| 3.荷瘤大鼠21周时心脏取血处死 | 第78页 |
| 4.腹腔脏器的观察以及取材 | 第78页 |
| 5.病理学检查 | 第78-80页 |
| 6.荷瘤大鼠免疫功能检测 | 第80页 |
| 7.统计学处理 | 第80页 |
| 三、结果 | 第80-85页 |
| 1.一般情况 | 第80页 |
| 2.大鼠的体重变化 | 第80页 |
| 3.荷瘤大鼠16周时外周血淋巴细胞表型检测 | 第80-81页 |
| 4.荷瘤大鼠21周时外周血、脾细胞表型和分泌IFN-γ水平检测 | 第81页 |
| 5.病理学检查结果 | 第81-85页 |
| 四、讨论 | 第85-87页 |
| 五、参考文献 | 第87-89页 |
| 第五部分 含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌对大鼠大肠癌生长的影响 | 第89-111页 |
| 一、材料 | 第89-91页 |
| 1.菌株 | 第89页 |
| 2.大鼠 | 第89页 |
| 3.试剂 | 第89-90页 |
| 4.引物 | 第90页 |
| 5.仪器 | 第90-91页 |
| 二、方法 | 第91-93页 |
| 1.大鼠大肠癌模型建立 | 第91页 |
| 2.荷瘤大鼠灌服疫苗菌 | 第91页 |
| 3.荷瘤大鼠16周时外周血淋巴细胞表型检测 | 第91-92页 |
| 4.荷瘤大鼠21周时处死 | 第92页 |
| 5.常规病理学检测 | 第92-93页 |
| 6.荷瘤大鼠免疫功能检测 | 第93页 |
| 7.免疫双荧光法检测组织中4-1BBL的表达 | 第93页 |
| 8.统计学处理 | 第93页 |
| 三、结果 | 第93-105页 |
| 1.大鼠一般情况的观察和体重变化 | 第93-94页 |
| 2.荷瘤大鼠16周时外周血淋巴细胞表型检测 | 第94页 |
| 3.荷瘤大鼠解剖观察、病理学观察和肿瘤分期 | 第94-95页 |
| 4.荷瘤大鼠21周时肥达氏反应和报告基因GFP的转录检测 | 第95页 |
| 5.荷瘤大鼠21周时外周血淋巴细胞和脾细胞表型检测 | 第95-96页 |
| 6.脾细胞分泌IFN-γ水平检测结果 | 第96页 |
| 7.荷瘤大鼠各种组织中4-1BBL的表达 | 第96-105页 |
| 四、讨论 | 第105-108页 |
| 五、参考文献 | 第108-111页 |
| 全文总结 | 第111-112页 |
| 综述 | 第112-133页 |
| 英文缩略词表 | 第133-134页 |
| 攻读学位期间获课题和公开发表的论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
