| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 部分缩略词表 | 第16-18页 |
| 上篇 文献综述 | 第18-69页 |
| 第一章 青枯劳尔氏菌的研究进展 | 第19-27页 |
| 1 青枯劳尔氏菌及其危害 | 第19-22页 |
| ·青枯劳尔氏菌形态学和生理学特征 | 第19-20页 |
| ·青枯劳尔氏菌分类地位 | 第20-21页 |
| ·青枯劳尔氏菌的危害 | 第21-22页 |
| 2 细菌性青枯病的表现症状 | 第22-24页 |
| 3 细菌性青枯病的地理分布 | 第24页 |
| 4 青枯劳尔氏菌的致病机理 | 第24-27页 |
| 第二章 青枯劳尔氏菌的三型泌出系统 | 第27-39页 |
| 1 青枯劳尔氏菌的基因组结构特点 | 第27-28页 |
| 2 青枯劳尔氏菌hrp基因簇 | 第28-29页 |
| 3 植物病原细菌三型泌出系统的结构 | 第29-32页 |
| 4 三型分泌系统的效应蛋白 | 第32-35页 |
| 5 青枯劳尔氏菌致病相关基因的调控机制 | 第35-39页 |
| 第三章 Harpin蛋白与植物的互作及其分子机理 | 第39-49页 |
| 1 Harpin在植物细胞中的作用位点 | 第39-42页 |
| 2 Harpin在植物上的效应及其作用机理 | 第42-49页 |
| ·Harpin在植物上的有益效应 | 第42-44页 |
| ·诱导植物抗病性 | 第42-43页 |
| ·诱导植物抗虫性 | 第43页 |
| ·诱导植株抗旱反应 | 第43-44页 |
| ·提高植物产量 | 第44页 |
| ·减少作物产后损失 | 第44页 |
| ·Harpin在植物上作用的信号通路 | 第44-49页 |
| ·水杨酸信号传导通路 | 第44-46页 |
| ·SA在SAR中的作用 | 第45页 |
| ·SA介导SAR的作用模式 | 第45-46页 |
| ·茉莉酸/乙烯信号传导通路 | 第46-47页 |
| ·脱落酸信号传导通路 | 第47-49页 |
| 第四章 茄子黄萎病的生物防治研究进展 | 第49-55页 |
| 1 茄子黄萎病病原菌概述 | 第49页 |
| 2 茄子黄萎病的生物防治研究 | 第49-52页 |
| ·生防细菌 | 第50-51页 |
| ·生防真菌 | 第51页 |
| ·其它生防因子 | 第51-52页 |
| 3 几丁质酶在植物病害生物防治中的作用 | 第52-55页 |
| ·几丁质酶的种类 | 第52-53页 |
| ·几丁质酶在生物防治中的应用 | 第53页 |
| ·几丁质酶的生防机理 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-69页 |
| 下篇研究内容 | 第69-167页 |
| 第一章 青枯劳尔氏菌ZJ3721 popW基因的遗传操作 | 第71-101页 |
| 摘要 | 第71页 |
| ABSTRACT | 第71-73页 |
| 第一节 青枯劳尔氏菌ZJ3721 PopW的原核表达 | 第73-91页 |
| 1 材料与方法 | 第73-85页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·引物设计与合成 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73-74页 |
| ·缓冲液 | 第74-76页 |
| ·青枯劳尔氏菌ZJ3721的特征鉴定 | 第76-77页 |
| ·生化变种的鉴定 | 第76-77页 |
| ·fliC-PCR验证 | 第77页 |
| ·青枯劳尔氏菌ZJ3721基因组DNA的提取 | 第77-78页 |
| ·目的基因的克隆 | 第78-83页 |
| ·目的基因的PCR扩增及产物纯化 | 第79-80页 |
| ·PCR产物与克隆载体的连接 | 第80-81页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第81页 |
| ·连接产物的转化 | 第81页 |
| ·质粒提取 | 第81-82页 |
| ·酶切验证 | 第82-83页 |
| ·目的基因的原核表达及纯化 | 第83-85页 |
| ·pETpopW,pETpopW_((1-159))和pETpopW_((160-366))表达载体的构建及转化 | 第83页 |
| ·融合蛋白的提取 | 第83页 |
| ·不同条件下PopW蛋白的表达 | 第83-84页 |
| ·SDS-PAEG分析 | 第84-85页 |
| ·PopW融合蛋白的纯化 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-91页 |
| ·ZJ3721的鉴定结果 | 第85-86页 |
| ·popW,popW_((1-159))和popW_((160-366))基因的克隆结果分析 | 第86-89页 |
| ·popW,popW_((1-159))和popW_((160-366))基因表达结果的分析 | 第89-90页 |
| ·不同条件下PopW蛋白的表达结果 | 第90-91页 |
| 第二节 青枯劳尔氏菌ZJ 3721 popW缺失突变体的构建 | 第91-101页 |
| 1 材料与方法 | 第91-97页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·引物设计与合成 | 第91页 |
| ·培养基 | 第91页 |
| ·缓冲液 | 第91-92页 |
| ·PCR反应体系和程序 | 第92-93页 |
| ·突变载体的构建 | 第93-94页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第94-95页 |
| ·青枯劳尔氏菌的电转化 | 第95页 |
| ·popW突变体的Southern杂交分析 | 第95-97页 |
| ·Southern转移 | 第95-96页 |
| ·探针的标记 | 第96-97页 |
| ·预杂交及杂交 | 第97页 |
| ·免疫检测 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-99页 |
| ·青枯劳尔氏菌popW基因缺失突变体的菌落形态 | 第97-98页 |
| ·青枯劳尔氏菌popW基因缺失突变体的验证 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 第二章 青枯劳尔氏菌ZJ3721 PopW蛋白的结构与功能研究 | 第101-123页 |
| 摘要 | 第101页 |
| ABSTRACT | 第101-103页 |
| 1 材料和方法 | 第103-114页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·引物设计与合成 | 第103-104页 |
| ·培养基 | 第104-107页 |
| ·缓冲液 | 第107页 |
| ·hrpV和hrpB突变体的构建 | 第107-108页 |
| ·引物设计与合成 | 第107-108页 |
| ·PopW多克隆抗体的制备 | 第108-109页 |
| ·兔抗血清的制备 | 第108-109页 |
| ·ELISA法测定效价 | 第109页 |
| ·Western Blot | 第109-110页 |
| ·PopW蛋白的热激及蛋白酶K处理 | 第110页 |
| ·致病性和HR测验 | 第110页 |
| ·PopW亚细胞定位载体的构建 | 第110-113页 |
| ·popW"基因的PCR扩增 | 第111页 |
| ·popW"基因与载体的连接 | 第111-112页 |
| ·阳性克隆的酶切验证 | 第112-113页 |
| ·土壤杆菌感受态的制备 | 第113页 |
| ·土壤杆菌感受态细胞的转化 | 第113页 |
| ·土壤杆菌对洋葱表皮的侵染 | 第113页 |
| ·PopW果胶酶活性的检测 | 第113-114页 |
| ·进化树分析 | 第114页 |
| 2 结果 | 第114-121页 |
| ·popW编码一种富含甘氨酸的Harpin蛋白 | 第114-115页 |
| ·popW在R.solanacearum ZJ3721的致病性及HR活性方面并非必需 | 第115-116页 |
| ·PopW是无活性的果胶酶同源物 | 第116页 |
| ·PopW全长及其N-末端Harpin结构域都可以引起HR | 第116-118页 |
| ·PopW通过三型泌出系统分泌到胞外 | 第118-119页 |
| ·PopW锚定在植物细胞壁上 | 第119-120页 |
| ·popW广泛存在于其它青枯劳尔氏菌中 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-123页 |
| 第三章 青枯劳尔氏菌ZJ3721 PopW蛋白诱导烟草系统获得性研究 | 第123-139页 |
| 摘要 | 第123页 |
| ABSTRACT | 第123-125页 |
| 1 材料与方法 | 第125-130页 |
| ·植物和微生物材料 | 第125页 |
| ·烟草对TMV抗性的测定 | 第125-126页 |
| ·H_2O_2的检测 | 第126-127页 |
| ·H_2O_2的原位检测 | 第126页 |
| ·H_2O_2含量的测定 | 第126-127页 |
| ·PAL活性的测定 | 第127页 |
| ·PPO活性的测定 | 第127页 |
| ·POD活性的测定 | 第127-128页 |
| ·信号通路标志基因表达的检测 | 第128-130页 |
| ·植物RNA的提取(Trizol法) | 第128页 |
| ·sscDNA的合成 | 第128-129页 |
| ·引物的设计 | 第129-130页 |
| 2 结果 | 第130-135页 |
| ·PopW能够诱导烟草抵抗TMV的侵染 | 第130-131页 |
| ·PopW能够诱导烟草叶片H_2O_2的积累 | 第131-132页 |
| ·烟草叶片中PAL活性的变化 | 第132-133页 |
| ·烟草叶片中POD活性的变化 | 第133-134页 |
| ·烟草叶片中PPO活性的变化 | 第134页 |
| ·PopW能够诱导烟草中PR-1基因的表达 | 第134-135页 |
| 3 讨论 | 第135-139页 |
| 第四章 青枯劳尔氏菌ZJ3721 PopW蛋白与蜡状芽孢杆菌对茄子黄萎病的防治 | 第139-155页 |
| 摘要 | 第139页 |
| ABSTRACT | 第139-141页 |
| 1 材料与方法 | 第141-146页 |
| ·菌株和培养条件 | 第141页 |
| ·产几丁质酶菌株的筛选 | 第141-142页 |
| ·菌株对黄萎病菌的拮抗实验 | 第142页 |
| ·菌株的鉴定 | 第142-143页 |
| ·几丁质酶活的检测 | 第143页 |
| ·几丁质酶的纯化 | 第143-144页 |
| ·粗酶的提取 | 第143-144页 |
| ·蛋白质层析分离 | 第144页 |
| ·几丁质酶的SDS-PAGE分析 | 第144-145页 |
| ·银染 | 第144-145页 |
| ·pH值、温度和贮藏时间对几丁质酶活力的影响 | 第145页 |
| ·对V.dahliae分生孢子萌发作用的检测 | 第145页 |
| ·温室实验 | 第145-146页 |
| ·数据统计 | 第146页 |
| 2 结果 | 第146-152页 |
| ·菌株的分离 | 第146-147页 |
| ·菌株的鉴定 | 第147页 |
| ·酶活力测定 | 第147-148页 |
| ·几丁质酶的SDS-PAGE分析 | 第148-149页 |
| ·温度,pH值和贮存时间对酶活力的影响 | 第149-150页 |
| ·对V.dahliae分生孢子萌发的抑制作用 | 第150-151页 |
| ·温室实验 | 第151-152页 |
| 3 讨论 | 第152-155页 |
| 参考文献 | 第155-167页 |
| 附录一 popW的序列 | 第167-168页 |
| 附录二 hrpB的序列 | 第168-169页 |
| 附录三 hrpV的序列 | 第169-171页 |
| 在读博士期间撰写和发表的学术论文 | 第171-173页 |
| 致谢 | 第173页 |
