| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·燃料乙醇概述 | 第9-13页 |
| ·燃料乙醇的发展现状 | 第10页 |
| ·纤维质发酵生产燃料乙醇的发展现状 | 第10-11页 |
| ·芒在燃料乙醇生产中的优势和地位 | 第11-13页 |
| ·芒的开发与利用情况 | 第12-13页 |
| ·巨芒与其它生物能源资源生产能力比较 | 第13页 |
| ·木质素研究进展 | 第13-16页 |
| ·木质素的生物合成途径 | 第14页 |
| ·基因工程调控木质素合成进展 | 第14-16页 |
| ·基因功能研究及RNA 干扰技术 | 第16-21页 |
| ·基因功能研究概况 | 第16页 |
| ·RNAi 概述 | 第16-17页 |
| ·RNAi 的特点 | 第17页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第17-18页 |
| ·RNAi 技术的应用 | 第18-20页 |
| ·RNAi 技术在植物基因功能研究中的应用 | 第19页 |
| ·RNAi 技术在植物发育及生理代谢途径研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·应用Gateway 技术构建RNAi 载体 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌种和载体 | 第23页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第23页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第23页 |
| ·主要溶液 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·生物信息分析软件及网站 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-33页 |
| ·总RNA 的提取和检测 | 第24-25页 |
| ·总RNA 的提取 | 第24页 |
| ·总RNA 质量的检测 | 第24-25页 |
| ·m RNA 的反转录 | 第25页 |
| ·PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第27页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·PCR 鉴定目的基因片段及测序 | 第28页 |
| ·Gateway 技术构建RNAi 载体 | 第28-33页 |
| ·入门克隆 | 第28-30页 |
| ·BP 反应 | 第29页 |
| ·BP 反应混合物转化感受态细胞（热激法） | 第29页 |
| ·BP 反应阳性克隆鉴定及测序 | 第29-30页 |
| ·入门克隆菌液抽提质粒DNA | 第30页 |
| ·表达克隆 | 第30-31页 |
| ·LR 反应 | 第30页 |
| ·LR 反应混合物转化感受态细胞（热激法） | 第30-31页 |
| ·PCR 检测LR 反应阳性克隆 | 第31页 |
| ·表达克隆的质粒提取及浓度、纯度检测 | 第31页 |
| ·表达克隆转化农杆菌LBA4404 感受态细胞 | 第31-33页 |
| ·农杆菌LBA4404 感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| ·表达克隆转化农杆菌LBA4404 感受态细胞 | 第32页 |
| ·阳性菌落的鉴定 | 第32页 |
| ·农杆菌中表达载体遗传稳定性的鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-45页 |
| ·总RNA 质量的检测 | 第33页 |
| ·RNA 的电泳检测 | 第33页 |
| ·RNA 的紫外吸收测定 | 第33页 |
| ·基因片段的克隆 | 第33-35页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第35-42页 |
| ·COMT | 第35-36页 |
| ·4CL | 第36-38页 |
| ·CCR | 第38-40页 |
| ·CAD | 第40-42页 |
| ·Gateway 构建RNAi 载体 | 第42-45页 |
| ·BP 反应阳性克隆检测 | 第42页 |
| ·LR 反应阳性克隆检测 | 第42-43页 |
| ·农杆菌中表达载体的菌液PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·农杆菌中表达载体的遗传稳定性 | 第44-45页 |
| 4 讨论与小结 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·基因片段的克隆 | 第45页 |
| ·干扰载体的构建 | 第45-46页 |
| ·Gateway 克隆技术 | 第46页 |
| ·进一步工作地设想 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| ·基因片段的克隆与序列分析 | 第47页 |
| ·基因干扰载体的构建 | 第47页 |
| ·表达克隆转化农杆菌 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 附录I 克隆片段测序结果 | 第51-56页 |
| 附录II RNA 干涉载体示意图 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |