基于双启动子载体的SUMO1 RNA干涉实验
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-17页 |
| ·SUMO 化修饰 | 第8-10页 |
| ·概述 | 第8页 |
| ·SUMO 途径和它的组成 | 第8-9页 |
| ·SUMO 修饰的生物学功能 | 第9-10页 |
| ·RNA 干涉 | 第10-14页 |
| ·RNA 干涉的机理及应用 | 第10-11页 |
| ·体外获得及导入siRNA 方法 | 第11-12页 |
| ·基于载体的RNAi 技术 | 第12-14页 |
| ·干涉序列的设计方法 | 第14-16页 |
| ·确定siRNA 的设计范围 | 第14页 |
| ·影响siRNA 功能的重要因素 | 第14-15页 |
| ·设计高特异性的siRNA | 第15页 |
| ·干涉序列设计的一般流程 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-35页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·实验材料和试剂 | 第17-18页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-35页 |
| ·技术路线 | 第20页 |
| ·SUMO1 干涉靶点的选择 | 第20-25页 |
| ·干涉载体的构建 | 第25-28页 |
| ·萤光素酶检测系统所需载体的构建 | 第28-32页 |
| ·基于Anti-HA 的外源干涉效果检测 | 第32-33页 |
| ·基于萤光素酶检测系统的外源干涉效果检测 | 第33页 |
| ·基于荧光蛋白的外源干涉效果检测 | 第33-34页 |
| ·基于 Anti-SUMO1 的内源干涉效果检测 | 第34-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-44页 |
| ·干涉载体的构建 | 第35-36页 |
| ·萤光素酶相关载体的构建 | 第36-38页 |
| ·RNA 提取效果检测 | 第36页 |
| ·SUMO1 ORF 及 3’UTR 区的扩增 | 第36-37页 |
| ·菌落PCR 验证及酶切验证 | 第37页 |
| ·酶切验证及测序 | 第37-38页 |
| ·基于Anti-HA 的外源干涉效果检测 | 第38-39页 |
| ·基于萤光素酶的干涉效果的检测 | 第39-40页 |
| ·基于荧光蛋白的外源干涉效果检测 | 第40-42页 |
| ·内源性干涉检测结果 | 第42页 |
| ·SUMO1 多克隆抗体的检测 | 第42页 |
| ·SUMO1 内源性干涉效果的检测 | 第42页 |
| ·综合分析 | 第42-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-47页 |
| ·RNAi 技术的应用前景 | 第44页 |
| ·RNAi 引发的非特异性干涉和脱靶效应 | 第44-45页 |
| ·外源性干涉检测方法的选择 | 第45页 |
| ·内源性干涉检测方法的选择 | 第45-46页 |
| ·本实验存在的不足之处 | 第46-47页 |
| 第五章 总结展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附件 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
