| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 HPV的分子生物学特征 | 第11-14页 |
| ·HPV的研究背景 | 第11页 |
| ·HPV的分子生物学特征 | 第11-14页 |
| 第二章 HPV的基因分型 | 第14-15页 |
| 第三章 高危型HPV E6和E7蛋白与宫颈癌 | 第15-20页 |
| ·高危型HPV E6蛋白与宫颈癌 | 第15-17页 |
| ·高危型HPV E6蛋白的结构 | 第15页 |
| ·高危型HPV E6蛋白的功能 | 第15-17页 |
| ·高危型HPV E6与p53蛋白 | 第15-16页 |
| ·高危型HPV E6与端粒酶 | 第16-17页 |
| ·高危型HPV E6与PDZ蛋白 | 第17页 |
| ·高危型HPV E6与其它 | 第17页 |
| ·高危型HPV E7蛋白与宫颈癌 | 第17-19页 |
| ·高危型HPV E7蛋白的结构 | 第17-18页 |
| ·高危型HPV E7蛋白的功能 | 第18-19页 |
| ·高危型HPV E7与pRb蛋白 | 第18页 |
| ·高危型HPV E7与AP-1(activator protein-1)转录因子家族 | 第18页 |
| ·高危型HPV E7与其它 | 第18-19页 |
| ·高危型HPV E6和E7蛋白的协同作用 | 第19-20页 |
| 第四章 具体步骤及过程 | 第20-32页 |
| ·材料与试剂 | 第20-21页 |
| ·组织标本 | 第20页 |
| ·质粒及菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-32页 |
| ·HPV 16 E6、E7基因的克隆 | 第21-24页 |
| ·模板DNA的提取 | 第21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21-22页 |
| ·HPV 16 E6、E7基因的扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收HPV16 E6、E7基因DNA片段 | 第23-24页 |
| ·HPV16 E6、E7基因克隆载体的构建与鉴定 | 第24-27页 |
| ·胶回收后的HPV16 E6、E7 DNA片段与T载体的连接反应 | 第24页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备及质粒的转化 | 第24-25页 |
| ·细菌的扩增和重组质粒DNA提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒序列分析 | 第26-27页 |
| ·HPV16 E6、E7基因表达载体的构建与鉴定 | 第27-29页 |
| ·pET28a(+)和重组质粒(pMD 19-T-E6,pMD 19-T-E7)的限制性内切酶反应 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳,凝胶中回收双酶切质粒pET28a(+)和E6、E7 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7的转化 | 第28-29页 |
| ·细菌的扩增和重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7提取步骤 | 第29页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7 PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7序列分析 | 第29页 |
| ·HPV16 E6、E7蛋白的表达 | 第29-32页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7转化BL21大肠杆菌 | 第29页 |
| ·HPV16 E6、E7蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第30-32页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第32-40页 |
| ·结果 | 第32-39页 |
| ·HPV 16 E6、E7基因的扩增 | 第32页 |
| ·重组质粒pMD 19-T-E6,pMD 19-T-E7 EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pMD 19-T-E6,pMD 19-T-E7的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pMD 19-T-E6,pMD 19-T-E7的序列测定 | 第34-35页 |
| ·质粒pET28a(+)EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7的PCR鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-E6、pET28a(+)-E7的序列测定 | 第36-37页 |
| ·HPV16 E6、E7蛋白的诱导表达 | 第37-39页 |
| ·讨论及展望 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第43-44页 |
| 中英文缩略表 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
