| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-29页 |
| 1 贝类的免疫系统 | 第13-17页 |
| ·细胞免疫 | 第13-15页 |
| ·吞噬作用 | 第14页 |
| ·包囊作用 | 第14页 |
| ·炎症和伤口修复 | 第14-15页 |
| ·体液免疫 | 第15-17页 |
| ·溶酶体酶 | 第15页 |
| ·酚氧化酶原激活系统 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽 | 第16页 |
| ·凝集素 | 第16-17页 |
| 2 铁蛋白 | 第17-20页 |
| ·铁蛋白的结构及特性 | 第17-19页 |
| ·铁蛋白的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·铁离子解毒和储存 | 第19页 |
| ·抗氧化功能 | 第19-20页 |
| ·铁蛋白的其他功能 | 第20页 |
| 3 血蓝蛋白 | 第20-27页 |
| ·血蓝蛋白的结构及特性 | 第21-24页 |
| ·血蓝蛋白的功能及分子生物学特性 | 第24-27页 |
| ·血蓝蛋白的载氧功能 | 第24-25页 |
| ·血蓝蛋白的酚氧化酶活性 | 第25-26页 |
| ·血蓝蛋白的免疫学特性 | 第26-27页 |
| ·血蓝蛋白的其它功能 | 第27页 |
| 4 本研究的内容、目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 鲍铁蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 | 第29-42页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·实验兔 | 第29页 |
| ·表达载体 | 第29页 |
| ·酶类及化学试剂 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·构建 AbFe1、AbFe2 基因的原核表达载体 | 第30-32页 |
| ·双酶切pUCAbFe1、pUCAbFe2 质粒 | 第31页 |
| ·玻璃奶（Banding）回收琼脂糖凝胶中的DNA | 第31-32页 |
| ·目的基因与表达载体连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的大量（100ml）制备 | 第32页 |
| ·连接产物转化至感受态细胞（E.coli DH5α） | 第32页 |
| ·快速提取小量质粒DNA 及双酶切鉴定重组子 | 第32-33页 |
| ·测序分析及构建分子进化树 | 第33页 |
| ·测序分析 | 第33页 |
| ·构建分子进化树 | 第33页 |
| ·诱导目的基因在大肠杆菌BL21、Rosetta 中表达 | 第33-34页 |
| ·将重组阳性质粒转化到表达宿主菌BL21、Rosetta 中 | 第33页 |
| ·IPTG 诱导表达目的蛋白 | 第33页 |
| ·菌液PCR 鉴定目的基因 | 第33-34页 |
| ·配制12% SDS-PAGE 蛋白分离凝胶 | 第34页 |
| ·制备AbFe1、AbFe2 蛋白的抗血清 | 第34-35页 |
| ·Western blot 检测抗体 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·BamHI 和XhoI 双酶切获得目的基因片段 | 第36-37页 |
| ·构建pET-b 系列表达载体 | 第37页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第37页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第37页 |
| ·AbFe1、AbFe2 的分子进化树分析 | 第37页 |
| ·IPTG 诱导表达 pET28bAbFe1、 pET22bAbFe2 的蛋白 | 第37-41页 |
| ·菌液PCR 鉴定表达菌液中AbFe1、AbFe2 的基因片段 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE 分析 pET28bAbFe1、 pET22bAbFe2 融合蛋白 | 第38-39页 |
| ·AbFe1、AbFe2 抗血清的制备 | 第39页 |
| ·Western blot 检测抗体的特异性 | 第39-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 鲍血蓝蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第42-54页 |
| 1 实验材料 | 第42页 |
| ·材料 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-47页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第42页 |
| ·原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第42-43页 |
| ·双酶切pMD18TAbHc1d、pUCAbHc1h 质粒 | 第43页 |
| ·筛选和鉴定重组质粒 | 第43页 |
| ·序列测定与分析 | 第43页 |
| ·AbH1d、AbH1h 基因 BL21、Rosetta 中表达 | 第43页 |
| ·制备表达目蛋白的抗血清 | 第43页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质含量 | 第43-44页 |
| ·电洗脱回收目的蛋白条带 | 第43-44页 |
| ·制作蛋白质的标准曲线 | 第44页 |
| ·纯化多克隆抗血清 | 第44-45页 |
| ·饱和硫酸铵分级纯化抗体 | 第44-45页 |
| ·宿主菌的丙酮提取物纯化抗体 | 第45页 |
| ·竞争ELISA | 第45-47页 |
| ·筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第45-46页 |
| ·竞争ELISA | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-53页 |
| ·构建原核表达载体 | 第47页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第47-48页 |
| ·AbH1d、AbH1h 测序结果比对 | 第48页 |
| ·pET28AbH1d、pET21AbH1h 的原核表达 | 第48-49页 |
| ·抗血清的制备及Western blot | 第49-50页 |
| ·BSA 蛋白浓度的测定及制作标准曲线 | 第50页 |
| ·纯化多克隆抗体 | 第50-51页 |
| ·ELISA 筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第51-52页 |
| ·竞争ELISA | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-57页 |
| ·pET 系统表达融合蛋白 | 第54页 |
| ·抗体的制备 | 第54-55页 |
| ·纯化抗血清 | 第55页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质含量 | 第55-56页 |
| ·ELISA 筛选抗血清与抗原的最佳结合浓度 | 第56页 |
| ·Western blot | 第56页 |
| ·全文小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录Ⅰ基因序列 | 第62-64页 |
| 附录Ⅱ载体图 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
