| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-33页 |
| ·蜘蛛丝蛋白 | 第14-16页 |
| ·蜘蛛丝及其理化特性 | 第14页 |
| ·蜘蛛丝蛋白基因结构 | 第14-15页 |
| ·人工获取蜘蛛丝蛋白的相关研究 | 第15-16页 |
| ·逆转录病毒载体 | 第16-20页 |
| ·逆转录病毒的分类与基因结构 | 第16-17页 |
| ·逆转录病毒载体的研究进展 | 第17-18页 |
| ·逆转录病毒载体的构建 | 第18-19页 |
| ·逆转录病毒载体的应用及展望 | 第19-20页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第20-21页 |
| ·胚胎干细胞 | 第21-28页 |
| ·胚胎干细胞的生物学特性 | 第21页 |
| ·胚胎干细胞的研究进展 | 第21-22页 |
| ·胚胎干细胞的培养 | 第22-25页 |
| ·胚胎干细胞诱导分化及其应用 | 第25-27页 |
| ·胚胎干细胞在其它领域的应用 | 第27-28页 |
| ·嵌合体的制备 | 第28-32页 |
| ·嵌合体的研究进展 | 第28-29页 |
| ·影响嵌合体制作的因素 | 第29-30页 |
| ·嵌合体动物的鉴定 | 第30页 |
| ·嵌合体应用 | 第30-32页 |
| ·研究目的意义 | 第32-33页 |
| 2 拖丝蛋白基因2S逆转录病毒载体的构建 | 第33-48页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·实验菌种、细胞系及基因 | 第33页 |
| ·试剂与药品 | 第33-34页 |
| ·实验试剂的配置 | 第34-35页 |
| ·实验用载体 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体的构建 | 第36-39页 |
| ·PlatE细胞和293GP细胞的传代培养 | 第39页 |
| ·PMX-2S-IRES-EGFP转染PlatE和293 GP细胞 | 第39-40页 |
| ·2S-假病毒滴度的检测 | 第40页 |
| ·拖丝蛋白基因2S在NIH3T3细胞基因组中的整合 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-45页 |
| ·蜘蛛托丝蛋白基因2S与pIRES2-EGFP表达载体的连接与鉴定 | 第41-42页 |
| ·PMX-2S-IRES-GFP逆转录病毒载体的构建 | 第42页 |
| ·PMX-2S-IRES-EGFP逆转录病毒载体的检测 | 第42-43页 |
| ·PlatE和293GP包装细胞特性 | 第43页 |
| ·包装细胞和转染方法对转染效果的影响 | 第43-44页 |
| ·2S假病毒感染NIH-3T3细胞及滴度测定 | 第44-45页 |
| ·蜘蛛拖丝蛋白基因2S在NIH-3T3细胞中的整合 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 3 饲养层的制备及ES细胞培养 | 第48-59页 |
| ·材料与方法 | 第48-52页 |
| ·实验小鼠与ES细胞 | 第48页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第48页 |
| ·溶液的配制 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·结果 | 第52-57页 |
| ·胎鼠成纤维细胞生长和形态特点 | 第52页 |
| ·冷冻复苏胎鼠成纤维细胞的接种存活率 | 第52-53页 |
| ·冷冻复苏胎鼠成纤维细胞的生长曲线 | 第53页 |
| ·丝裂霉素C处理时间对MEF的影响 | 第53-54页 |
| ·细胞密度对饲养层细胞的影响 | 第54页 |
| ·ES细胞的形态和生长特性 | 第54-55页 |
| ·冷冻复苏对小鼠ES细胞的影响 | 第55-56页 |
| ·小鼠ES细胞的碱性磷酸酶活性 | 第56页 |
| ·小鼠ES细胞的多能性因子检测 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 4 转蜘蛛拖丝蛋白基因2S嵌合体小鼠的制备 | 第59-75页 |
| ·材料与方法 | 第59-67页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·试剂与药品 | 第59页 |
| ·溶液的配置 | 第59-61页 |
| ·实验方法 | 第61-67页 |
| ·结果 | 第67-72页 |
| ·2S假病毒感染的小鼠ES细胞GFP表达特性 | 第67页 |
| ·GFP阳性ES细胞的PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·2S阳性ES细胞的核型分析 | 第68页 |
| ·制备2S阳性ES细胞嵌合体小鼠 | 第68页 |
| ·嵌合体小鼠的检测 | 第68-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 附录A | 第85-88页 |
| 附录B | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
