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除虫链霉菌uhk01sav基因的功能研究

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
符号说明第9-10页
文献综述第10-24页
 1. 链霉菌的生长发育及进化树分析第10-14页
 2. 除虫链霉菌基因组的研究进展第14-15页
 3. 阿维菌素的生物合成及其调控的研究进展第15-19页
 4. 寡霉素生物合成及其调控研究进展第19-21页
 5. 戊内酯菌素生物合成及其调控研究进展第21-23页
 6. 结束语第23-24页
引言第24-25页
1. 材料与方法第25-36页
   ·材料第25-27页
     ·菌株、质粒及引物第25-26页
     ·培养基第26-27页
     ·主要试剂和仪器第27页
   ·uhk01sav 基因缺失cosmid 的构建第27-30页
     ·uhk01sav 中断盒的扩增第29页
     ·BW25113/pIJ790/cosmid7-41 的构建第29页
     ·uhk01sav 缺失cosmid 的构建第29-30页
   ·除虫链霉菌中uhk01sav 基因缺失突变体的构建第30-32页
     ·接合转移实验第30页
     ·突变体进行菌液PCR 验证第30页
     ·Southern blot 验证第30-32页
     ·划线收取uhk01sav 基因缺失突变体孢子第32页
   ·uhk01sav 基因缺失突变体的表型观察第32-33页
     ·uhk01sav 基因缺失突变体的电镜观察第32页
     ·uhk01sav 基因缺失突变体的发酵及抗生素测定第32-33页
   ·8165△uhk01sav 的互补实验第33-34页
     ·互补载体的构建第33页
     ·8165△uhk01sav 的交叉互补实验第33-34页
     ·表型观察第34页
     ·菌株发酵及抗生素测定第34页
   ·天蓝色链霉菌M145△uhk01 突变体的交叉互补实验第34页
   ·RNA 提取及real-time RT-PCR 分析第34-36页
2. 结果第36-47页
   ·除虫链霉菌uhk01sav 基因的序列分析第36页
   ·uhk01sav 基因缺失突变体的构建及表型分析第36-40页
     ·cosmid?uhk01sav 的构建第37-38页
     ·8165?uhk01sav 突变体的构建及验证第38页
     ·8165 和8165△uhk01sav 的电镜观察结果第38-39页
     ·8165 和8165△uhk01sav 的抗生素产量比较第39-40页
   ·8165△uhk01sav 的交叉互补实验及表型分析第40-43页
     ·互补载体的构建第41页
     ·互补菌株的验证第41-42页
     ·互补菌株的表型分析和电镜观察第42-43页
     ·互补菌株的抗生素测定第43页
   ·M145△uhk01 的互补实验第43-44页
   ·Real-time RT-PCR 分析比较原始株与突变体中3 种重要抗生素生物合成基因簇的转录差异第44-47页
     ·RNA 定量和Tm 值优化结果第44-45页
     ·uhk01sav 参与寡霉素生物合成的调控是由途径特异性调控因子介导的第45页
     ·uhk01sav 还参与阿维菌素及戊内酯菌素生物合成的调控第45-47页
3. 讨论第47-49页
参考文献第49-53页
致谢第53-54页
攻读学位期间发表的学术论文目录第54页

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