| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 幽门螺杆菌研究进展 | 第13-17页 |
| ·形态学特征 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·H.pylori的致病机制 | 第14-15页 |
| ·H.pylorI感染与胃肠道疾病 | 第15-17页 |
| ·H.pylorI感染的防治 | 第17页 |
| 2 尿素酶研究进展 | 第17-20页 |
| ·尿素酶的生物结构 | 第17-18页 |
| ·尿素酶的致病机制 | 第18-19页 |
| ·尿素酶在临床中的应用 | 第19-20页 |
| ·尿素酶疫苗的研制 | 第20页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 抗幽门螺杆菌UreB单克隆抗体A1H10、B3D9、A3C10抗原识别表位的鉴定 | 第22-49页 |
| 试验一 UreB蛋白的第一次截短表达及抗原表位的初步鉴定 | 第23-30页 |
| 1 材料和方法 | 第23-26页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-26页 |
| 2 结果 | 第26-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·分段抗原UP1、UP2、UP3、UP4表达质粒的构建与鉴定 | 第27页 |
| ·UP1、UP2、UP3、UP4重组蛋白的表达 | 第27-28页 |
| ·UP1、UP2、UP3、UP4重组蛋白western blot分析 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 试验二 UreB蛋白的第二次截短表达及抗原表位的进一步鉴定 | 第30-34页 |
| 1 材料和方法 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·分段抗原UP21、UP22、UP23、UP24、UP25、UP26表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·UP21、UP22、UP23、UP24、UP25、UP26重组蛋白的表达 | 第32页 |
| ·UP1、UP2、UP3、UP4重组蛋白western blot分析 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 试验三 UreB蛋白的第三次截短表达及抗原表位的精确定位 | 第34-44页 |
| 1 材料和方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| ·目的基因的扩增 | 第38页 |
| ·分段抗原P31、P32、P33、P34、P35、P36、P37、P38、P39表达质粒的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·GST-P31、GST-P32、GST-P33、GST-P34、GST-P35、GST-P36、GST-P37、GST-P38、GST-P39重组蛋白的表达 | 第38-39页 |
| ·GST-P31、GST-P32、GST-P33、GST-P34、GST-P35、GST-P36、GST-P37、GST-P38、GST-P39重组蛋白western blot分析 | 第39-40页 |
| ·ELISA检测结果 | 第40-41页 |
| ·表位多肽序列的空间定位 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 试验四 合成表位多肽进一步确证单克隆抗体A1H10、B3D9、A3C10所针对的抗原表位 | 第44-49页 |
| 1 材料和方法 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-47页 |
| ·ELISA方法确定单抗A1H10、B3D9、A3C10所针对的抗原表位 | 第45-46页 |
| ·Dot blot检测单抗A1H10、B3D9、A3C10所针对的抗原表位 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| ·尿素酶表位的研究 | 第47-48页 |
| ·抗原表位的鉴定方法 | 第48-49页 |
| 第三章 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)B细胞抗原表位的免疫学功能研究 | 第49-55页 |
| 1 材料和方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-54页 |
| ·多抗血清的效价测定 | 第51页 |
| ·ELISA检测多抗血清与不同表位合成肽和天然UreB蛋白的识别 | 第51-52页 |
| ·多抗血清与天然H.pylori菌株UreB蛋白的western blot分析 | 第52-53页 |
| ·尿素酶活性抑制试验结果 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 呈现表达串联表位及其免疫学评价 | 第55-71页 |
| 试验一 表达系统的建立 | 第55-65页 |
| 1 材料和方法 | 第55-58页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| 2 结果 | 第58-63页 |
| ·目的基因的优化 | 第58-59页 |
| ·基因敲入质粒的构建 | 第59页 |
| ·目的基因敲入 | 第59-61页 |
| ·无抗重组菌的获得 | 第61-62页 |
| ·重组菌的蛋白表达分析 | 第62页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹分析 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 试验二 免疫评价 | 第65-71页 |
| 1 材料与方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-70页 |
| ·UreB特异性抗体的测定 | 第67-68页 |
| ·载体菌特异性抗体的测定 | 第68页 |
| ·肠液中sIgA滴度测定 | 第68-69页 |
| ·western blot检测抗体特异性 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第79页 |
