| 缩写词 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一部分 多种血清型AAV载体的制备 | 第12-19页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 材料和方法 | 第13-16页 |
| 1. 实验材料 | 第13-14页 |
| ·6种辅助病毒HSV-RC | 第13页 |
| ·通用型AAV载体质粒与重组质粒 | 第13-14页 |
| ·细胞株 | 第14页 |
| 2. 试剂及耗材 | 第14页 |
| 3. 设备 | 第14页 |
| 4. 重组AAV制备方法 | 第14-15页 |
| 5. AAV病毒载体质量检测 | 第15-16页 |
| ·病毒滴度分析 | 第15页 |
| ·病毒的鉴别和纯度分析 | 第15-16页 |
| 结果 | 第16-18页 |
| 1. AAV病毒载体的生产和纯化流程 | 第16页 |
| 2. AAV病毒的滴度 | 第16-17页 |
| 3. rAAV-EGFP病毒的SDS-PAGE分析 | 第17-18页 |
| 讨论 | 第18-19页 |
| 第二部分 AAV载体"反向感染"阵列技术的创建及应用 | 第19-35页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-22页 |
| 1. AAV反向感染培养板的制备流程 | 第20页 |
| 2. AAV病毒包被液 | 第20页 |
| 3. 制备6种rAAV-CMV-EGFP板 | 第20页 |
| 4. 检测细胞对AAV病毒感染的敏感性 | 第20-21页 |
| 5. 用发光检测仪检测Gluc的活性 | 第21页 |
| 6. 用96微孔板荧光检测仪测定Gluc活性 | 第21页 |
| 7. 用多标记微孔板检测仪扫描96孔板中细胞EGFP荧光强度 | 第21-22页 |
| 结果 | 第22-32页 |
| 1. AAV反向感染方法的建立 | 第22-24页 |
| ·96孔板中rAAV病毒的用量 | 第22页 |
| ·每孔加入细胞数对检测的影响 | 第22-23页 |
| ·不同配方溶液包被的AAV病毒活性检测 | 第23页 |
| ·培养板上包被的AAV病毒的热稳定性 | 第23-24页 |
| 2. AAV RI Array方法用于不同型AAV病毒的细胞感染谱分析 | 第24-28页 |
| ·6种不同型的AAV病毒及在培养板上排列 | 第24-25页 |
| ·6种rAAV-EGFP感染16种细胞的EGFP荧光扫描数据 | 第25-26页 |
| ·6种rAAV-EGFP感染16种细胞48h荧光扫描图 | 第26-27页 |
| ·荧光显微镜照相与荧光强度扫描值的比较 | 第27-28页 |
| ·丁酸钠对AAV感染BHK21细胞表达EGFP的影响 | 第28页 |
| 3. 一种新的细胞中miRNA活性谱检测方法 | 第28-32页 |
| ·pAAV2-miRNAsensor质粒结构 | 第28页 |
| ·miRNA活性检测流程 | 第28-29页 |
| ·细胞中57种miRNA的活性谱检测 | 第29-32页 |
| 讨论 | 第32-34页 |
| 小结 | 第34-35页 |
| 第三部分 rAAV8-HBV1.3病毒用于建立HBV小鼠模型 | 第35-51页 |
| 前言 | 第35-36页 |
| 材料与方法 | 第36-41页 |
| 1. 材料 | 第36-37页 |
| ·质粒、细胞株和病毒 | 第36页 |
| ·试剂盒、试剂和耗材 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| 2. 方法 | 第37-41页 |
| ·pAAV2neo-HBV1.3质粒及rAAV-HBV1.3病毒的细胞实验 | 第37-38页 |
| ·rAAV-HBV1.3病毒感染细胞及HBsAg和HBeAg检测实验 | 第37页 |
| ·质粒pAAV2neo-HBV1.3转染细胞及HBsAg和HBeAg检测实验 | 第37-38页 |
| ·动物实验 | 第38-41页 |
| ·C57BL/6小鼠注射rAAV8-HBV1.3实验 | 第38-39页 |
| ·C57BL/6与Balb/c小鼠注射rAAV8-HBV1.3比较 | 第39-41页 |
| 结果 | 第41-48页 |
| 1. pAAV2neo-HBV1.3质粒及重组AAV-HBV1.3病毒的细胞实验 | 第41-42页 |
| ·重组AAV-HBV1.3病毒感染细胞及HBsAg和HBeAg检测的实验结果 | 第41页 |
| ·质粒pAAV2neo-HBV1.3转染细胞及HBsAg和HBeAg检测的实验结果 | 第41-42页 |
| 2. 动物实验结果 | 第42-48页 |
| ·C57BL/6小鼠注射rAAV8-HBV1.3实验结果 | 第42-46页 |
| ·血清中HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb检测结果 | 第42页 |
| ·PCR法检测小鼠肝脏及血清中HBV DNA的S基因片段 | 第42-43页 |
| ·小鼠肝脏及血清中HBV DNA拷贝数 | 第43页 |
| ·HBV DNA在肝脏内的复制方式的确定 | 第43-45页 |
| ·小鼠肝脏病理分析 | 第45页 |
| ·免疫组化检测肝脏HBV抗原 | 第45-46页 |
| ·C57BL/6与Balb/c小鼠注射rAAV8-HBV1.3比较 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 小结 | 第50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 综述 | 第51-67页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 发表文章 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录1:Establishment of an AAV Reverse Infection-Based Array | 第70-76页 |
| 附录2:高嗜肝性8型重组腺相关病毒体内转染法制备乙型肝炎病毒持续感染小鼠模型 | 第76-83页 |
