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深海微生物多样性和嗜盐古菌乙醇代谢相关酶基因研究

致谢第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-15页
1 绪论第15-47页
   ·引言第15页
   ·深海微生物多样性研究概况第15-20页
     ·深海微生物的生境第16-17页
     ·深海微生物的营养来源第17-19页
     ·深海微生物的多样性第19-20页
   ·深海热液区微生物多样性研究进展第20-29页
     ·深海热液区的环境特点和全球分布第21-23页
     ·深海热液区微生物的多样性第23-25页
     ·深海热液区微生物代谢的多样性第25-28页
     ·深海热液区微生物nifH基因的多样性第28-29页
   ·深海嗜压微生物研究进展第29-41页
     ·嗜压微生物的定义第30-31页
     ·深海嗜压微生物的培养第31-35页
     ·深海嗜压微生物的多样性第35-40页
     ·深海嗜压微生物的环境适应性第40-41页
   ·嗜盐古菌基因组与乙醇代谢研究进展第41-46页
     ·嗜盐古菌Natronomonas pharaonis的基因组与功能基因第41-45页
     ·嗜盐古菌的乙醇代谢及相关基因第45-46页
   ·本论文的主要内容和研究意义第46-47页
2 西南印度洋洋中脊深海热液区沉积物原核微生物多样性研究第47-71页
   ·引言第47-48页
   ·材料与方法第48-53页
     ·样品采集第48-49页
     ·试剂与培养基第49页
       ·试剂第49页
       ·培养基第49页
     ·环境基因组DNA的提取第49页
     ·目的基因的PCR第49-51页
       ·引物第49-50页
       ·反应体系与过程第50-51页
     ·基因文库的构建第51-52页
     ·基因文库的分析第52-53页
       ·16SrRNA基因文库的分析第52-53页
       ·nifH基因文库的分析第53页
   ·实验结果第53-68页
     ·16SrRNA和nifH基因文库的构建第53-54页
     ·古菌16S rRNA基因的多样性第54-58页
     ·细菌16S rRNA基因的多样性第58-67页
     ·nifH基因的多样性第67-68页
   ·讨论第68-70页
   ·本章小节第70-71页
3 波多黎各海沟深海嗜压细菌的培养和多相分类学研究第71-93页
   ·引言第71-72页
   ·材料与方法第72-84页
     ·样品采集第72页
     ·试剂与培养基第72-74页
       ·试剂第72-73页
       ·培养基第73-74页
     ·深海微生物的高压富集第74-76页
       ·高压富集培养第74-75页
       ·细胞的DAPI荧光染色计数第75-76页
     ·菌株的分离纯化第76-77页
       ·稀释灭绝法第76页
       ·硅胶的制备第76-77页
       ·硅胶培养和分离单克隆菌落第77页
     ·深海菌株的多相分类学研究第77-84页
       ·生长限制因子研究第77-78页
       ·形态研究第78页
       ·电子供体和电子受体研究第78-79页
       ·酶学活性研究第79-80页
       ·糖醇产酸研究第80页
       ·硫化氢、吲哚产生和运动状态研究第80-81页
       ·全细胞脂肪酸研究第81页
       ·16S rRNA基因序列的测定以及系统发育研究第81-83页
       ·基因组DNA的G+C mol%研究第83-84页
   ·实验结果第84-88页
     ·深海微生物的高压富集和菌株YC-1的分离纯化第84页
     ·菌株YC-1的多相分类学特征第84-88页
       ·表型特征第84-85页
       ·生理学特征第85-86页
       ·生物化学特征第86页
       ·遗传学特征第86-88页
   ·讨论第88-90页
   ·新种描述第90-91页
     ·Description of Profundimonas gen.nov.(新属描述)第90-91页
     ·Description of Profundimonas piezophila sp.nov.(新种描述)第91页
   ·本章小节第91-93页
4 嗜盐古菌Natronomonas pharaonis乙醇代谢相关酶基因研究第93-114页
   ·引言第93-94页
   ·材料与方法第94-105页
     ·菌株与质粒第94页
     ·试剂与培养基第94-95页
       ·试剂第94页
       ·培养基第94-95页
     ·细胞总RNA的提取第95-96页
     ·目的基因的RT-PCR第96-97页
       ·引物第96页
       ·反应体系与过程第96-97页
     ·基因组DNA的提取第97-98页
     ·目的基因的PCR第98-99页
       ·引物第98-99页
       ·反应体系与过程第99页
     ·表达载体的构建第99-101页
     ·目的蛋白质的异源表达第101-102页
     ·目的蛋白质的纯化第102-104页
       ·NpADH的纯化第102-103页
       ·NpALDH的纯化第103-104页
     ·酶学性质的研究第104-105页
       ·酶活性的测定第104-105页
       ·pH对酶活性的影响第105页
       ·温度对酶活性的影响第105页
       ·盐浓度对酶活性的影响第105页
   ·实验结果第105-111页
     ·乙醇对N.pharaonis生长的影响第105-107页
     ·乙醇胁迫下N.pharaonis相关酶基因的表达第107-108页
     ·N.pharaonis乙醇代谢相关酶基因的克隆、异源表达与纯化第108-109页
       ·NpADH的克隆、异源表达与纯化第108-109页
       ·NpALDH的克隆、异源表达与纯化第109页
     ·N.pharaonis乙醇代谢相关酶的性质第109-111页
       ·NpADH的性质第109-110页
       ·NpALDH的性质第110-111页
   ·讨论第111-113页
   ·本章小结第113-114页
5 结论第114-115页
参考文献第115-132页
攻读学位期间发表的学术论文(含待发表)第132页

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