| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 卤醇脱卤酶的概述 | 第12-14页 |
| 1.2 卤醇脱卤酶的结构特点及催化机制 | 第14页 |
| 1.3 卤醇脱卤酶的改造研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 卤醇脱卤酶的定向进化 | 第14-15页 |
| 1.3.2 卤醇脱卤酶的理性设计 | 第15页 |
| 1.3.3 卤醇脱卤酶的半理性设计 | 第15-16页 |
| 1.4 卤醇脱卤酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 本课题研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)表达优化 | 第19-26页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂及培养基 | 第19-20页 |
| 2.2.3 主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 菌种活化 | 第21页 |
| 2.3.2 最佳诱导时机 | 第21-22页 |
| 2.3.3 最佳诱导温度 | 第22页 |
| 2.3.4 最佳诱导时间 | 第22-23页 |
| 2.3.5 最佳诱导剂浓度 | 第23页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第23-25页 |
| 2.4.1 最佳诱导时机 | 第23页 |
| 2.4.2 最佳诱导温度 | 第23-24页 |
| 2.4.3 最佳诱导时间 | 第24页 |
| 2.4.4 最佳诱导剂浓度 | 第24-25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)酶学特性 | 第26-40页 |
| 3.1 引言 | 第26页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第26-29页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 3.2.2 主要试剂及培养基 | 第26-27页 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 | 第27-29页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 3.3.1 菌种活化 | 第29页 |
| 3.3.2 重组菌的培养及诱导表达 | 第29页 |
| 3.3.3 超声破胞 | 第29-30页 |
| 3.3.4 分子量检测 | 第30页 |
| 3.3.5 蛋白量测定 | 第30-31页 |
| 3.3.6 粗酶液最适温度条件探索 | 第31页 |
| 3.3.7 粗酶液最适pH条件探索 | 第31页 |
| 3.3.8 温度稳定性探索 | 第31-32页 |
| 3.3.9 金属离子种类对酶活影响探索 | 第32页 |
| 3.3.10 Zn2+浓度对酶活影响探索 | 第32-33页 |
| 3.3.11 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)动力学参数的测定 | 第33页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第33-39页 |
| 3.4.1 E.coli BL21(DE3)(pET28a-HHDH_(XF2))表达结果 | 第33-34页 |
| 3.4.2 低浓度蛋白的标准曲线 | 第34-35页 |
| 3.4.3 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的最适温度 | 第35页 |
| 3.4.4 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的最适pH | 第35-36页 |
| 3.4.5 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的温度稳定性 | 第36-37页 |
| 3.4.6 金属离子对卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的影响 | 第37页 |
| 3.4.7 Zn2+浓度对酶活的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.8 酶的动力学参数测定 | 第38-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的定向进化 | 第40-50页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第40-43页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第40页 |
| 4.2.2 主要试剂及培养基 | 第40-41页 |
| 4.2.3 主要溶液的配制 | 第41-42页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第42-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.3.1 质粒的提取 | 第43页 |
| 4.3.2 易错PCR克隆卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)基因 | 第43-44页 |
| 4.3.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 4.3.4 表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.3.5 易错PCR突变文库的构建 | 第45-46页 |
| 4.3.6 高通量筛选 | 第46页 |
| 4.3.7 突变子复筛 | 第46-47页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第47-49页 |
| 4.4.1 质粒提取及易错PCR结果 | 第47-48页 |
| 4.4.2 突变文库构建 | 第48页 |
| 4.4.3 突变子复筛结果 | 第48-49页 |
| 4.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)全细胞催化1,3-二氯-2-丙醇合成环氧氯丙烷 | 第50-58页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第50-52页 |
| 5.2.1 菌株及质粒 | 第50页 |
| 5.2.2 主要试剂及培养基 | 第50-51页 |
| 5.2.3 主要溶液的配制 | 第51-52页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第52页 |
| 5.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 5.3.1 细胞干重实验 | 第52-53页 |
| 5.3.2 重组菌的培养及诱导表达 | 第53页 |
| 5.3.3 温度对催化反应的影响 | 第53页 |
| 5.3.4 pH对催化反应的影响 | 第53-54页 |
| 5.3.5 底物浓度对催化反应的影响 | 第54页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第54-57页 |
| 5.4.1 细胞干重实验 | 第54页 |
| 5.4.2 温度对催化反应的影响 | 第54-55页 |
| 5.4.3 pH对催化反应的影响 | 第55-56页 |
| 5.4.4 底物浓度对催化反应的影响 | 第56-57页 |
| 5.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第六章 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)降解菊酯类农药 | 第58-65页 |
| 6.1 引言 | 第58页 |
| 6.2 实验材料与设备 | 第58-61页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第58-59页 |
| 6.2.2 主要试剂及培养基 | 第59页 |
| 6.2.3 主要溶液的配制 | 第59-60页 |
| 6.2.4 主要仪器 | 第60-61页 |
| 6.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 6.3.1 高效氯氰菊酯特征吸收峰的检出 | 第61页 |
| 6.3.2 标准曲线的制作 | 第61页 |
| 6.3.3 回收率的测定 | 第61页 |
| 6.3.4 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)对高效氯氰菊酯的降解率 | 第61-62页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第62-63页 |
| 6.4.1 特征吸收峰的检出 | 第62页 |
| 6.4.2 标准曲线的制作 | 第62-63页 |
| 6.4.3 利用分光光度法测定高效氯氰菊酯的回收率 | 第63页 |
| 6.4.4 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)对高效氯氰菊酯的降解率 | 第63页 |
| 6.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第七章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 7.1 结论 | 第65页 |
| 7.2 展望 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第76-77页 |
| 附录2 卤醇脱卤酶HHDH_(XF2)的基因信息 | 第77页 |
