| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-19页 |
| 1.1 蛋白质的糖基化修饰类型及研究策略 | 第7-12页 |
| 1.1.1 N-糖基化修饰 | 第7-9页 |
| 1.1.2 O-糖基化修饰 | 第9页 |
| 1.1.3 去糖基化的策略研究 | 第9-12页 |
| 1.2 糖基化对于蛋白质结构和功能的影响 | 第12-16页 |
| 1.2.1 糖基化对于蛋白质分泌的影响 | 第12-13页 |
| 1.2.2 糖基化对于蛋白质受体功能的影响 | 第13页 |
| 1.2.3 糖基化对于蛋白质热稳定性的影响 | 第13-15页 |
| 1.2.4 糖基化对于酶活性的影响 | 第15-16页 |
| 1.3 肠激酶的基础研究 | 第16-17页 |
| 1.3.1 肠激酶在原核体系中的表达 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肠激酶在酵母体系中的表达 | 第17页 |
| 1.4 本研究的设计思路及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 去糖基化牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第19-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第19页 |
| 2.1.2 主要生化试剂及试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.3 溶液及培养基配置 | 第19-21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 野生型牛肠激酶糖基化位点的分析 | 第21-24页 |
| 2.2.2 去糖基化牛肠激酶轻链突变载体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.3 去糖基化菌株多拷贝子的筛选 | 第27-29页 |
| 2.2.4 去糖基化突变蛋白的表达及纯化 | 第29-31页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第31-38页 |
| 2.3.1 野生型牛肠激酶糖基化位点的确定 | 第31-33页 |
| 2.3.2 去糖基化牛肠激酶轻链载体的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.3 去糖基化菌株多拷贝子的筛选 | 第35-36页 |
| 2.3.4 去糖基化突变蛋白的表达及纯化 | 第36-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 N-糖基化修饰对牛肠激酶酶学性质的影响 | 第39-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.1 蛋白及主要生化试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 溶液配制 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 肠激酶的酶活测定 | 第39-41页 |
| 3.2.2 牛肠激酶表达量的测定 | 第41页 |
| 3.2.3 牛肠激酶的最适温度以及最适pH的测定 | 第41页 |
| 3.2.4 牛肠激酶动力学常数的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.5 牛肠激酶的热稳定评价 | 第42-43页 |
| 3.2.6 牛肠激酶结构的测定 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第44-56页 |
| 3.3.1 N-糖基化修饰对牛肠激酶分泌表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.2 N-糖基化修饰对牛肠激酶酶活及动力学常数的影响 | 第45-49页 |
| 3.3.3 N-糖基化修饰对牛肠激酶最适温度及最适pH的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.4 N-糖基化修饰对牛肠激酶热稳定性的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.5 N-糖基化修饰对牛肠激酶结构的影响 | 第53-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 发表论文及参加科研情况说明 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
