| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-35页 |
| ·启动子的概念和分类 | 第17-21页 |
| ·启动子的概念 | 第17-18页 |
| ·启动子的分类 | 第18-21页 |
| ·组成型启动子 | 第19页 |
| ·组织特异型启动子 | 第19-20页 |
| ·诱导型启动子 | 第20-21页 |
| ·转录因子的概念和分类 | 第21-24页 |
| ·转录因子的概念 | 第21-22页 |
| ·转录因子作用的分子机理 | 第22-23页 |
| ·植物逆境相关的转录因子 | 第23-24页 |
| ·WRKY类转录因子 | 第23页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第23页 |
| ·MYB类转录因子 | 第23-24页 |
| ·AP2/EREBP类转录因子 | 第24页 |
| ·NAC类转录因子 | 第24页 |
| ·盐芥的研究进展 | 第24-26页 |
| ·盐芥和拟南芥在盐胁迫条件下转录物组变化的比较 | 第25页 |
| ·盐芥是耐盐耐旱研究的模式植物 | 第25-26页 |
| ·H~+-PPase研究进展 | 第26-29页 |
| ·H~+-PPase基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·H~+-PPase基因表达和活性水平的调控 | 第28-29页 |
| ·TsVP基因的研究进展 | 第29页 |
| ·核酸—蛋白质互作的生物化学研究方法 | 第29-33页 |
| ·体外结合分析方法 | 第29-31页 |
| ·硝化纤维膜过滤实验 | 第29-30页 |
| ·足迹法 | 第30页 |
| ·电泳迁移率变动实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第30-31页 |
| ·Southwestern杂交 | 第31页 |
| ·体内研究方法 | 第31-33页 |
| ·非变性染色质免疫沉淀(nChIP) | 第31-32页 |
| ·变性(交联)染色质免疫沉淀(xChIP) | 第32页 |
| ·Re-ChIP | 第32页 |
| ·ChIP Chop | 第32页 |
| ·ChIP-on-chip (Chromatin immuno-precipitation based on microarray) | 第32-33页 |
| ·本工作的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 盐芥TsVP启动子中盐诱导响应核心区域的鉴定 | 第35-57页 |
| ·材料与方法 | 第35-40页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·植物材料及培养条件 | 第35页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第35页 |
| ·培养基及药品试剂 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-40页 |
| ·质粒的重组和转化 | 第36页 |
| ·启动子的生物信息学分析以及缺失体的构建 | 第36-37页 |
| ·拟南芥的转化和筛选 | 第37-38页 |
| ·转基因拟南芥的分子生物学检测和组织化学分析 | 第38-39页 |
| ·核心区域在烟草中的瞬时表达分析 | 第39-40页 |
| ·实验结果与分析 | 第40-54页 |
| ·启动子序列信息学分析 | 第40-44页 |
| ·缺失突变体的构建 | 第44-45页 |
| ·转基因拟南芥的筛选以及PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·PT1转基因拟南芥的组织化学分析 | 第46-48页 |
| ·PT2--PT9转基因拟南芥的组织化学分析 | 第48-50页 |
| ·130bp序列的功能验证 | 第50-53页 |
| ·130bp序列的生物信息学分析 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 TsNac1和TsVOZ1的克隆和功能分析 | 第57-82页 |
| ·材料与方法 | 第57-68页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-68页 |
| ·质粒的重组和转化方法 | 第58页 |
| ·构建酵母单杂交所用质粒 | 第58-59页 |
| ·盐芥RNA的分离 | 第59页 |
| ·盐芥cDNA合成 | 第59-60页 |
| ·酵母菌株Y187的遗传转化 | 第60-61页 |
| ·酵母质粒提取 | 第61页 |
| ·阳性酵母质粒转化大肠杆菌 | 第61页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1基因全长的克隆 | 第61-62页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1蛋白原核表达 | 第62-63页 |
| ·盐芥总蛋白及核蛋白的提取 | 第63-64页 |
| ·凝胶阻滞试验测定目的蛋白与DNA结合活性 | 第64页 |
| ·Real-time RT-PCR分析TsNac1和TsVOZ1在盐芥中的表达模式 | 第64-65页 |
| ·植物过表达载体以及干扰载体的构建 | 第65-66页 |
| ·拟南芥和盐芥的遗传转化与筛选 | 第66-67页 |
| ·转基因材料耐盐性分析 | 第67页 |
| ·抗体制备和Western blotting检测 | 第67-68页 |
| ·统计学分析 | 第68页 |
| ·实验结果与分析 | 第68-80页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第68-69页 |
| ·盐芥cDNA表达文库的制备 | 第69页 |
| ·利用酵母单杂交试验筛选目的蛋白 | 第69-72页 |
| ·cDNA表达文库质量的测定 | 第69-70页 |
| ·盐芥cDNA表达文库的筛选 | 第70-72页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1全长基因的克隆及生物信息学分析 | 第72页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1的表达分析 | 第72-74页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1的原核表达 | 第74-75页 |
| ·TsNac1和TsVOZ1的原核表达载体的构建 | 第74页 |
| ·TsNac1原核表达蛋白的诱导与纯化 | 第74-75页 |
| ·TsVOZ1原核表达蛋白的诱导与纯化 | 第75页 |
| ·TsNac1重组蛋白与TsVP启动子中130bp序列的体外结合 | 第75页 |
| ·抗体的制备 | 第75-77页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第77页 |
| ·转基因拟南芥和转基因盐芥的产生 | 第77-78页 |
| ·转基因拟南芥的耐盐性分析 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 第四章 转录因子TsNac1调控基因的鉴定与初步分析 | 第82-112页 |
| ·材料与方法 | 第82-90页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-90页 |
| ·CHIP-on-chip分析 | 第82-89页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第89-90页 |
| ·Real-time RT-PCR验证CHIP-on-chip实验结果 | 第90页 |
| ·实验结果 | 第90-110页 |
| ·TsNac1在TsVP启动子中的结合位点鉴定 | 第90页 |
| ·TsNac1蛋白的CHIP-on-chip结果分析 | 第90-97页 |
| ·TsNac1蛋白部分靶基因的分析及实验结果验证 | 第97-104页 |
| ·TsNac1蛋白部分靶基因的功能聚类分析 | 第104页 |
| ·部分TsNac1蛋白结合基因的功能分析 | 第104-110页 |
| ·具有转运体活性的蛋白 | 第104-105页 |
| ·具有催化活性的蛋白 | 第105-107页 |
| ·具有结构分子功能的蛋白 | 第107页 |
| ·具有转录调控活性的蛋白 | 第107-109页 |
| ·具有结合功能的蛋白 | 第109-110页 |
| ·小结与讨论 | 第110-112页 |
| 结语与展望 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 附录1 异源过表达TsH3.1基因可以显著促进烟草的生长 | 第129-136页 |
| 附录2 本实验中新克隆得到的基因序列 | 第136-138页 |
| 在读期间发表论文以及申请专利 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第140页 |
